Mengapa kita membutuhkan mikroskop confocal?
1. Setelah upaya dan perbaikan dari para pendahulu kita yang hebat, mikroskop optik telah mencapai tingkat yang sempurna. Faktanya, mikroskop biasa dapat memberikan kita gambar mikroskopis yang indah dengan sederhana dan cepat. Namun, terjadilah peristiwa yang membawa inovasi revolusioner ke dunia mikroskop yang hampir sempurna ini, yaitu penemuan "mikroskop confocal pemindaian laser". Ciri khas mikroskop jenis baru ini adalah mengadopsi sistem optik yang hanya mengekstrak informasi gambar dari permukaan tempat fokus terkonsentrasi. Dengan mengubah fokus sekaligus mengembalikan informasi yang diperoleh ke dalam memori gambar, maka dapat diperoleh gambar yang jelas dengan kecerdasan informasi tiga dimensi yang lengkap. Melalui metode ini, informasi mengenai bentuk permukaan yang tidak dapat dipastikan dengan mikroskop konvensional dapat diperoleh dengan mudah. Selain itu, untuk mikroskop optik pada umumnya, "meningkatkan resolusi" dan "memperdalam kedalaman fokus" adalah kondisi yang kontradiktif, terutama pada perbesaran tinggi. Namun, dalam mikroskop confocal, masalah ini mudah dipecahkan.
2. Keuntungan sistem optik confocal
Diagram skema mikroskop confocal laser
Sistem optik confocal digunakan untuk menerangi sampel dengan titik-titik, sedangkan cahaya yang dipantulkan juga diterima oleh sensor titik. Ketika sampel ditempatkan pada titik fokus, hampir semua cahaya yang dipantulkan dapat mencapai perangkat fotosensitif. Ketika sampel menyimpang dari titik fokus, cahaya yang dipantulkan tidak dapat mencapai perangkat fotosensitif. Artinya, dalam sistem optik confocal, hanya gambar yang bertepatan dengan titik fokus yang akan dihasilkan, dan titik cahaya serta cahaya tersebar yang tidak berguna akan terlindung.
Mengapa menggunakan laser?
Dalam sistem optik confocal, sampel diterangi dan cahaya yang dipantulkan juga diterima oleh sensor titik. Oleh karena itu, sumber cahaya titik menjadi diperlukan. Laser adalah sumber cahaya yang sangat titik. Dalam kebanyakan kasus, sumber cahaya mikroskop confocal adalah sumber cahaya laser. Selain itu, monokromatisitas, arah, dan bentuk sinar laser yang sangat baik juga merupakan alasan penting mengapa laser digunakan secara luas.
4. Pengamatan waktu nyata berdasarkan pemindaian berkecepatan tinggi menjadi mungkin
Pemindaian laser menggunakan Acoustic Optical Deflector (AO prime) pada arah horizontal dan cermin Servo Galvano pada arah vertikal. Karena tidak adanya getaran mekanis pada unit bias audio optik, pemindaian berkecepatan tinggi dapat dilakukan dan diamati secara real-time di layar pemantauan. Sifat kecepatan tinggi dari kamera jenis ini merupakan item yang sangat penting yang secara langsung mempengaruhi kecepatan pemfokusan dan pengambilan posisi.
5. Hubungan antara posisi fokus dan kecerahan
Dalam sistem optik confocal, kecerahan sampel tinggi ketika ditempatkan dengan benar pada posisi fokus, dan kecerahannya menurun tajam sebelum dan sesudahnya (garis padat pada Gambar 4). Selektivitas sensitif bidang fokus ini merupakan prinsip di balik penentuan arah ketinggian dan perluasan kedalaman fokus dalam mikroskop confocal. Dibandingkan dengan ini, mikroskop optik tipikal tidak menunjukkan perubahan kecerahan yang signifikan sebelum dan sesudah posisi fokus (garis putus-putus pada Gambar 4).
6. Kontras dan resolusi tinggi
Biasanya pada mikroskop optik akan terjadi pantulan cahaya yang menyimpang dari titik fokus
