Dua Metode Pengamatan Mikroskopis yang Umum Digunakan
1, observasi lapangan gelap
Bidang pandang gelap sebenarnya adalah iluminasi bidang gelap Ciri-cirinya berbeda dengan bidang pandang terang, karena tidak secara langsung mengamati cahaya yang menerangi, melainkan mengamati cahaya yang dipantulkan atau difraksi dari objek yang diperiksa. Oleh karena itu, bidang pandang menjadi latar belakang gelap, sedangkan objek yang diperiksa menyajikan gambar terang
Prinsip medan gelap didasarkan pada fenomena optik Tyndall, dimana partikel debu tidak dapat diamati oleh mata manusia ketika terkena cahaya kuat karena difraksi yang disebabkan oleh cahaya kuat. Jika cahaya diproyeksikan secara miring ke atasnya, partikel tersebut tampak bertambah volumenya karena pantulan cahaya, sehingga terlihat oleh mata manusia.
Perlengkapan khusus yang diperlukan untuk pengamatan medan gelap adalah lampu sorot medan gelap Ciri-cirinya adalah tidak membiarkan berkas cahaya melewati benda dari bawah ke atas, tetapi mengubah jalur cahaya menjadi miring ke arah benda, sehingga cahaya iluminasi tidak langsung masuk ke lensa objektif, dan menggunakan bayangan terang yang dibentuk oleh pantulan atau difraksi cahaya pada permukaan benda yang diperiksa. Resolusi pengamatan medan gelap jauh lebih tinggi dibandingkan dengan pengamatan lapangan terang, mencapai hingga 0,02-0,004
2, Metode pemeriksaan cermin kontras fase
Keberhasilan penemuan mikroskop fase kontras dalam perkembangan mikroskop optik merupakan pencapaian penting dalam teknologi mikroskop modern. Kita tahu bahwa mata manusia hanya dapat membedakan panjang gelombang (warna) dan amplitudo (kecerahan) gelombang cahaya. Untuk spesimen biologi yang tidak berwarna dan transparan, ketika cahaya melewatinya, panjang gelombang dan amplitudo tidak banyak berubah, sehingga sulit untuk mengamati spesimen di medan terang.
Mikroskop kontras fase menggunakan perbedaan panjang jalur optik objek yang diperiksa untuk pemeriksaan cermin, secara efektif memanfaatkan fenomena interferensi cahaya untuk mengubah perbedaan fase yang tidak dapat dibedakan oleh mata manusia menjadi perbedaan amplitudo yang dapat dibedakan. Bahkan zat yang tidak berwarna dan transparan pun dapat terlihat jelas. Hal ini sangat memudahkan pengamatan sel hidup, oleh karena itu mikroskop fase kontras banyak digunakan pada mikroskop terbalik.
Prinsip dasar mikroskop kontras fase adalah mengubah perbedaan jalur optik cahaya tampak yang melewati spesimen menjadi perbedaan amplitudo, sehingga meningkatkan kontras antara berbagai struktur dan menjadikannya jelas dan terlihat. Setelah melewati spesimen, cahaya mengalami pembiasan, menyimpang dari jalur optik asli dan tertunda sebesar 1/4 λ (panjang gelombang). Jika perbedaan jalur optik ditambah atau dikurangi 1/4 λ lagi, perbedaan jalur optik menjadi 1/2 λ, dan interferensi antara dua berkas cahaya bertambah atau berkurang setelah sumbu digabungkan, meningkatkan kontras Dalam hal struktur, mikroskop kontras fase memiliki dua
perbedaan khusus dari mikroskop optik biasa:
1. Diafragma annular terletak di antara sumber cahaya dan kondensor, dan fungsinya membentuk kerucut cahaya berongga yang melewati kondensor dan fokus pada spesimen
2. Pelat fase sudut: Pelat fase yang dilapisi magnesium fluorida ditambahkan ke lensa objektif, yang dapat menunda fase cahaya langsung atau cahaya terdifraksi sebesar 1/4 λ. Ini dapat dibagi menjadi dua jenis:
(1) . Pelat fase A+: Tunda cahaya langsung sebesar 1/4 λ, dan tambahkan dua rangkaian gelombang cahaya setelah menggabungkan sumbu. Amplitudo meningkat, dan struktur spesimen menjadi lebih terang dibandingkan media sekitarnya, membentuk kontras terang (atau kontras negatif)
(2) . Pelat fase B+: Menunda cahaya yang terdifraksi sebesar 1/4 λ, dan mengurangi gelombang cahaya setelah menggabungkan sumbu dua rangkaian sinar cahaya, yang mengakibatkan penurunan amplitudo dan membentuk kontras gelap (atau kontras positif). Strukturnya menjadi lebih gelap dibandingkan medium di sekitarnya
