Dua Metode Pengamatan Mikroskop Umum
1. Pengamatan Medan Gelap
Pengamatan medan gelap menggunakan iluminasi medan gelap. Berbeda dengan observasi lapangan terang, cahaya yang menerangi tidak dilihat secara langsung; hanya cahaya yang dipantulkan atau didifraksikan oleh spesimen yang terdeteksi. Akibatnya, bidang pandang memiliki latar belakang gelap sedangkan spesimen tampak terang.
Pengamatan medan gelap didasarkan pada efek Tyndall dalam optik. Partikel debu tidak terlihat oleh mata manusia di bawah cahaya terang langsung karena difraksi cahaya. Ketika cahaya menumbuk partikel secara miring, pantulan cahaya membuat partikel tampak membesar dan terlihat.
Aksesori khusus yang diperlukan untuk observasi medan gelap adalah kondensor medan gelap. Ini mencegah berkas cahaya melewati spesimen secara vertikal ke atas. Sebaliknya, ia mengarahkan cahaya untuk menerangi spesimen pada sudut miring. Cahaya yang menerangi tidak langsung masuk ke lensa objektif, dan bayangan terang dibentuk oleh cahaya yang dipantulkan dan didifraksi dari permukaan spesimen. Resolusi observasi medan gelap jauh lebih tinggi dibandingkan observasi medan terang, yaitu mencapai 0,02–0,004 μm.
2. Mikroskop fase-kontras
Dalam pengembangan mikroskop optik, penemuan mikroskop fase kontras merupakan pencapaian besar dalam mikroskop modern. Mata manusia hanya dapat membedakan panjang gelombang (warna) dan amplitudo (kecerahan) gelombang cahaya. Untuk spesimen biologis yang tidak berwarna dan transparan, cahaya melewatinya dengan sedikit perubahan pada panjang gelombang atau amplitudo, sehingga sulit untuk diamati dalam kondisi medan terang.
Mikroskop fase kontras melakukan pemeriksaan berdasarkan perbedaan jalur optik spesimen. Ini secara efektif menggunakan interferensi cahaya untuk mengubah perbedaan fase (tidak terlihat oleh mata manusia) menjadi perbedaan amplitudo yang dapat dibedakan. Bahkan zat transparan tak berwarna pun dapat divisualisasikan dengan jelas. Hal ini sangat memudahkan pengamatan sel hidup, sehingga mikroskop fase kontras banyak digunakan dengan mikroskop terbalik.
Prinsip dasar mikroskop fase kontras adalah mengubah perbedaan jalur optik cahaya tampak yang ditransmisikan melalui spesimen menjadi perbedaan amplitudo, sehingga meningkatkan kontras antara struktur yang berbeda dan membuatnya terlihat jelas. Setelah melewati spesimen, cahaya dibiaskan, menyimpang dari jalur aslinya dan diperlambat sebesar 1/4 panjang gelombang. Perlambatan atau kemajuan tambahan sebesar 1/4 panjang gelombang menghasilkan perbedaan jalur optik total sebesar 1/2 panjang gelombang. Kedua sinar tersebut ditumpangkan dan diintervensi, menambah atau mengurangi amplitudo untuk meningkatkan kontras. Secara struktural, mikroskop fase kontras memiliki dua ciri khusus yang membedakannya dari mikroskop optik biasa.
