Ada dua jenis mikroskop fluoresensi berdasarkan jalur cahayanya:
1. Mikroskop fluoresensi transmisi: Sumber cahaya eksitasi digunakan untuk merangsang fluoresensi dengan melewatkan bahan spesimen melalui lensa kondensor. Konsentrator medan gelap yang umum digunakan juga dapat digunakan, dan konsentrator biasa dapat digunakan untuk mengatur reflektor untuk mengarahkan dan mengarahkan cahaya eksitasi ke spesimen. Ini adalah mikroskop fluoresensi yang relatif kuno. Keuntungannya adalah fluoresensi yang kuat pada perbesaran rendah, tetapi kelemahannya adalah fluoresensinya menurun dengan bertambahnya pembesaran. Oleh karena itu, lebih baik mengamati material spesimen yang lebih besar.
2. Mikroskop fluoresensi cahaya jatuh adalah jenis mikroskop fluoresensi baru yang dikembangkan di zaman modern. Berbeda dengan cara di atas, cahaya eksitasi jatuh dari lensa objektif ke bawah ke permukaan spesimen, menggunakan lensa objektif yang sama dengan kondensor iluminasi dan lensa objektif untuk mengumpulkan fluoresensi. Pemisah berkas warna ganda perlu ditambahkan ke jalur optik, yang berjarak 45 derajat dari uranium ringan. Sudut, cahaya eksitasi dipantulkan ke lensa objektif dan difokuskan pada sampel. Fluoresensi yang dihasilkan oleh sampel, serta cahaya eksitasi yang dipantulkan dari permukaan lensa objektif dan kaca penutup, masuk ke lensa objektif dan kembali ke pemisah berkas warna ganda, memisahkan cahaya eksitasi dan fluoresensi. Cahaya sisa eksitasi kemudian diserap oleh filter pemblokiran. Jika kombinasi berbeda dari filter eksitasi/pemisah berkas warna ganda/filter pemblokiran digunakan, kombinasi tersebut dapat memenuhi kebutuhan produk reaksi fluoresen yang berbeda. Keunggulan mikroskop fluoresensi ini adalah penerangan lapangan yang seragam, pencitraan yang jelas, dan fluoresensi yang lebih kuat dengan pembesaran yang lebih besar.
Petunjuk penggunaan mikroskop fluoresensi
1. Nyalakan sumber cahaya. Lampu merkuri bertekanan sangat tinggi perlu dipanaskan terlebih dahulu selama beberapa menit untuk mencapai kecerahan maksimum.
2. Mikroskop fluoresensi transmisi memerlukan pemasangan filter eksitasi yang diperlukan antara sumber lampu dan kondensor, dan filter pemblokiran yang sesuai di belakang lensa objektif. Mikroskop fluoresensi cahaya jatuh perlu memasukkan filter eksitasi yang diperlukan/pembagi berkas warna ganda/blok filter pemblokiran ke dalam slot jalur optik.
3. Amati dengan mikroskop berdaya rendah dan sesuaikan pusat sumber cahaya sesuai dengan perangkat penyesuaian berbagai jenis mikroskop fluoresensi, sehingga terletak di tengah seluruh titik iluminasi.
4. Tempatkan spesimen dan fokuskan untuk observasi. Perhatian harus diberikan selama penggunaan: Jangan mengamati langsung dengan mata Anda sebelum memasang filter untuk menghindari kerusakan mata; Saat mengamati spesimen dengan mikroskop minyak, harus digunakan mikroskop minyak khusus non fluoresen; Setelah lampu merkuri bertekanan tinggi dimatikan, tidak dapat langsung dinyalakan kembali. Diperlukan waktu 5 menit untuk memulai ulang, jika tidak maka akan menjadi tidak stabil dan mempengaruhi umur lampu merkuri.
(3) Mengamati di bawah mikroskop fluoresensi pada platform pengajaran menggunakan filter cahaya biru violet, dapat terlihat sel-sel yang diwarnai dengan pewarna fluoresen oranye acridine 0.01%. Inti dan sitoplasma tereksitasi menghasilkan dua warna fluoresensi yang berbeda (hijau tua dan merah oranye).
