Volume blok spesimen jaringan
Pada mikroskop yang dilengkapi lensa kondensor, Anda dapat menggerakkan kondensor ke atas dan ke bawah untuk mengatur kecerahan ke tingkat yang sesuai. Selain itu, Anda dapat mengubah bukaan diafragma iris untuk mendapatkan kecerahan yang sesuai. Jika cahaya terlalu redup, naikkan kondensor secukupnya dan buka bukaan diafragma iris lebih lebar. Jika cahayanya terlalu kuat, turunkan kondensor secukupnya dan kecilkan bukaan diafragma iris. Jika cahaya masih menyilaukan setelah penyesuaian ini, letakkan filter yang sesuai pada dudukan di bawah kondensor untuk mendapatkan penerangan yang memuaskan. Tentu saja, kemahiran dalam mengatur posisi vertikal kondensor, mengatur bukaan diafragma iris, dan memilih filter yang sesuai memerlukan akumulasi pengalaman praktis dari waktu ke waktu.
Aspek penting lainnya dari mikroskop biologis terletak pada prosedur pengambilan sampel bahan dan isolasi sel. Setelah pengeringan beku (FD), penanaman resin, dan pemotongan ultra tipis beku, kehati-hatian harus dilakukan untuk menjaga komposisi unsur semua komponen seluler tanpa merusak sel yang dimaksudkan untuk observasi dan analisis. Mikroanalisis sinar-X melibatkan prosedur yang rumit dan biaya tinggi. Akan sangat disesalkan jika menarik kesimpulan yang salah jika sel yang diperiksa setelah persiapan yang lama dan melalui beberapa langkah ternyata rusak atau tidak dapat hidup. Misalnya, kardiomiosit yang diisolasi melalui pencernaan kolagenase menunjukkan dua bentuk morfologi: sel berbentuk batang memanjang dan sel bulat. Yang bulat adalah sel-sel mati yang rusak dan terluka selama isolasi sel.
Kandungan dan distribusi elektrolit berbeda secara signifikan antara kedua jenis sel ini. Kardiomiosit bulat mengandung kadar natrium yang sangat tinggi dan kadar kalium yang sangat rendah, serta konsentrasi kalsium yang sangat meningkat di mitokondria. Verifikasi silang dengan metode analitik lain menegaskan bahwa tingginya natrium, rendahnya kalium, dan tinggi kalsium mitokondria dalam sel bulat disebabkan oleh kerusakan membran sel selama isolasi.
Kriofiksasi sel dan jaringan biasanya dimulai dengan pembekuan, diikuti dengan penyimpanan dalam nitrogen cair. Pembekuan dalam air sangat penting untuk kualitas pengawetan. Sel hidup dan jaringan segar mengandung banyak air. Selama pembekuan kecil, bagian sel atau jaringan yang bersentuhan langsung dengan kriogen (terutama nitrogen cair) membeku dan berfiksasi terlebih dahulu, membentuk cangkang beku yang menghalangi pembekuan dan fiksasi cepat pada bagian tengah spesimen. Akibatnya, kristal es sering diamati di area tengah sel yang lebih besar selama mikroanalisis sinar-X.
Untuk menghindari masalah ini, digunakan kriogen dengan titik leleh lebih tinggi dari nitrogen cair namun lebih rendah dari −80 derajat. Di antara berbagai pilihan yang tersedia, propana cair mudah diperoleh, berbiaya rendah, dan menawarkan laju pendinginan yang sangat cepat (titik didih: −42,12 derajat ; titik leleh: −187,1 derajat ; berat molekul: 44,1). Satu-satunya kelemahannya adalah sifat mudah terbakar.
