Prinsip dan karakteristik struktural mikroskop fluoresensi
Mikroskop fluoresensi menggunakan titik dengan efisiensi cahaya tinggi untuk memancarkan panjang gelombang cahaya tertentu (seperti sinar ultraviolet 3650 in atau cahaya biru ungu 4200 in) melalui sistem penyaringan warna sebagai cahaya eksitasi, dan membangkitkan zat fluoresen dalam sampel untuk memancarkan berbagai warna fluoresensi. Setelah itu diamati melalui perbesaran lensa objektif dan okuler. Dengan cara ini, mudah dikenali bahkan saat fluoresensi sangat lemah dengan latar belakang yang kuat, dengan sensitivitas tinggi. Ini terutama digunakan untuk mempelajari struktur dan fungsi sel, serta komposisi kimia. Struktur dasar mikroskop fluoresensi terdiri dari mikroskop optik biasa ditambah aksesori seperti sumber cahaya neon, filter eksitasi, pemisah berkas dichroic, dan filter pemblokiran. Sumber cahaya neon umumnya menggunakan lampu merkuri bertekanan sangat tinggi (50-200W), yang dapat memancarkan cahaya dengan berbagai panjang gelombang. Namun, setiap zat fluoresen memiliki panjang gelombang cahaya eksitasi yang menghasilkan fluoresensi terkuat, sehingga filter eksitasi (biasanya filter eksitasi ultraviolet, ungu, biru, dan hijau) perlu ditambahkan agar hanya panjang gelombang cahaya eksitasi tertentu yang dapat menembus dan menyinari spesimen, sambil menyerap semua cahaya lainnya. Setelah disinari oleh cahaya eksitasi, setiap zat memancarkan fluoresensi yang terlihat lebih lama dari panjang gelombang iradiasi dalam waktu yang sangat singkat. Fluoresensi memiliki kekhususan dan umumnya lebih lemah dari cahaya eksitasi. Untuk mengamati fluoresensi tertentu, perlu menambahkan pemblokiran (atau penekanan) di belakang lensa objektif dan menggunakannya dalam kombinasi.
Perbedaan antara mikroskop fluoresensi dan mikroskop biasa
1. Metode pencahayaan biasanya menggunakan jenis sinar jatuh, di mana sumber cahaya diproyeksikan ke sampel melalui lensa objektif;
2. Sumber cahaya adalah sinar ultraviolet, dengan panjang gelombang lebih pendek dan resolusi lebih tinggi dari mikroskop biasa;
3. Ada dua filter khusus, yang di depan sumber cahaya digunakan untuk menyaring cahaya tampak, dan yang di antara lensa mata dan lensa objektif digunakan untuk menyaring sinar ultraviolet untuk melindungi mata manusia.
Mikroskopi fluoresensi juga merupakan jenis mikroskop optik, dengan perbedaan utama adalah panjang gelombang eksitasi yang berbeda. Ini menentukan perbedaan dalam struktur dan penggunaan antara mikroskop fluoresen dan mikroskop optik biasa.
Mikroskopi fluoresensi adalah alat dasar untuk sitokimia imunofluoresensi. Ini terdiri dari komponen utama seperti sumber cahaya, sistem pelat filter, dan sistem optik. Ini menggunakan panjang gelombang cahaya tertentu untuk merangsang sampel memancarkan fluoresensi, dan memperbesarnya melalui lensa objektif dan sistem lensa mata untuk mengamati gambar fluoresensi sampel.
