Perbedaan antara mikroskop confocal laser dan mikroskop optik tradisional
Laser Scanning Confocal Fluorescence Microscopy adalah alat analisis biologi molekuler dan sel yang relatif canggih yang menggunakan komputer, laser, dan teknologi pemrosesan gambar untuk mendapatkan data tiga dimensi dari sampel biologis. Ini terutama digunakan untuk mengamati struktur sel hidup dan perubahan biologis molekul dan ion tertentu, analisis kuantitatif, dan penentuan kuantitatif waktu nyata.
Prinsip mikroskop confocal laser: gunakan lubang jarum iluminasi yang ditempatkan di belakang sumber cahaya dan lubang jarum deteksi ditempatkan di depan detektor untuk mewujudkan iluminasi titik dan deteksi titik. Cahaya yang dipancarkan dari sumber cahaya melalui lubang jarum iluminasi difokuskan pada titik pada bidang fokus sampel, dan fluoresensi yang dipancarkan dari titik ini dicitrakan pada lubang jarum deteksi, dan setiap cahaya yang dipancarkan di luar titik ini diblokir oleh deteksi. lubang jarum. Lubang jarum iluminasi dan lubang jarum pendeteksi berkonjugasi dengan titik iradiasi atau titik yang terdeteksi, sehingga titik yang terdeteksi adalah titik confocal, dan bidang tempat titik yang terdeteksi berada adalah bidang confocal.
Komputer menampilkan titik yang terdeteksi di layar komputer dalam bentuk titik gambar. Untuk menghasilkan gambar yang lengkap, sistem pemindaian di jalur optik memindai bidang fokus sampel untuk menghasilkan gambar confocal yang lengkap. Selama tahap bergerak naik dan turun sepanjang sumbu Z, lapisan sampel baru dipindahkan ke bidang confocal, dan lapisan baru sampel dicitrakan pada monitor. Dengan gerakan kontinu sumbu Z, gambar kontinu dari berbagai lapisan sampel dapat diperoleh. Gambar potongan ringan.
Perbedaan Antara Mikroskop Cahaya Tradisional
Mikroskop fluoresensi tradisional memiliki kekurangan yang tidak dapat diatasi: struktur fluoresen di luar bidang fokus kabur dan kabur. Alasannya adalah sebagian besar spesimen biologis memiliki struktur yang tumpang tindih. Jika struktur berlabel fluoresensi didistribusikan pada tingkat yang berbeda dan tumpang tindih, fluoresensi yang tersebar dari atas atau di bawah bidang fokus juga diterima oleh lensa objektif, dan resolusi mikroskop fluoresensi akan sangat meningkat. mengurangi.
Berdasarkan mikroskop optik tradisional, mikroskop confocal pemindaian laser menggunakan sinar laser sebagai sumber cahaya, mengadopsi prinsip dan alat pemfokusan konjugat, dan menggunakan komputer untuk melakukan pemrosesan gambar digital, observasi, analisis, dan output dari objek yang diamati. Sampel dapat dipindai secara tomografi dan dicitrakan untuk pengamatan non-destruktif dan analisis struktur spasial sel tiga dimensi. Pada saat yang sama, menggunakan probe pelabelan imunofluoresen dan pelabelan fluoresen ion, teknologi ini tidak hanya dapat mengamati sel tetap dan bagian jaringan, tetapi juga melakukan pengamatan dan deteksi dinamis waktu nyata terhadap struktur, molekul, ion, dan aktivitas kehidupan sel hidup, di tingkat subseluler Mengamati sinyal fisiologis seperti Ca2 plus , nilai pH, potensial membran dan perubahan morfologi sel, telah menjadi generasi baru alat penelitian yang kuat di bidang morfologi, biologi sel molekuler, ilmu saraf, farmakologi, dan genetika.
