Penggunaan dan Tindakan Pencegahan Mikroskop Fluoresensi Stereo
Instruksi:
(1) Tempatkan lembar materi di atas panggung.
(2) Nyalakan penstabil tegangan mikroskop fluoresen. Kemudian tekan grup mulai untuk menyalakan lampu UV dan jangan matikan dalam waktu 15 menit, dan jangan hidupkan lagi dalam waktu 3 menit setelah dimatikan.
(3) Putar filter eksitasi ke v, filter pemisahan warna ke v, dan pilih filter pemblokiran 495 atau 475nm.
(4) Pilih mikroskop objektif fluoresen uvFL40, uvFL100 untuk pemeriksaan mikroskopis.
(5) Tambahkan minyak non-fluorescent pada slide, pertama gunakan 40 x, lalu gunakan mikroskop pemfokusan 100 x untuk memeriksa. Fluoresensi muncul.
(7) Karena fluoresensi zat fluoresen secara bertahap melemah seiring waktu ketika disinari oleh sinar ultraviolet, bidang pandang harus sering diubah selama pemeriksaan mikroskopis.
(8) mikroskop pembesaran rendah uvFL10 atau uvFL20 juga dapat digunakan untuk memeriksa bahan (tidak ada minyak fluoresen yang ditambahkan saat menggunakan lensa berdaya rendah).
Metode perekaman gambar fluoresensi:
Gambar fluoresensi yang dilihat oleh mikroskop fluoresensi memiliki karakteristik morfologis dan warna serta kecerahan fluoresensi. Saat menilai hasil, keduanya harus digabungkan untuk penilaian yang komprehensif. Hasilnya dicatat berdasarkan indikator subyektif, yaitu pengamatan visual oleh pekerja. Sebagai pengamatan kualitatif umum, pada dasarnya dapat diandalkan. Dengan perkembangan teknologi dan ilmu pengetahuan, indikator objektif digunakan untuk mencatat hasil penilaian dalam berbagai tingkatan, seperti spektrofotometer sel, penganalisis citra, dan instrumen lainnya. Namun, hasil yang dicatat oleh instrumen ini juga harus digabungkan dengan penilaian subjektif.
Fotografi mikroskop fluoresensi sangat diperlukan untuk merekam gambar fluoresensi. Karena fluoresensi mudah memudar dan melemah, perlu untuk mencatat hasilnya secara real time. Metode ini pada dasarnya sama dengan fotomikrografi biasa. Hanya perlu menggunakan film fotosensitif berkecepatan tinggi seperti ASA200 atau lebih tinggi atau 24. lebih tinggi. Karena sinar ultraviolet memiliki efek yang kuat pada pendinginan fluoresensi, seperti penanda FITC, kecerahan fluoresensi akan berkurang hingga 50 persen saat disinari dengan sinar ultraviolet selama 30 detik. Oleh karena itu, jika kecepatan pencahayaan terlalu lambat, gambar berpendar tidak dapat diambil. Mikroskop fluoresensi penelitian umum memiliki perangkat sistem fotomikrografi semi-otomatis atau sepenuhnya otomatis.
Tindakan pencegahan:
(1) Beroperasi secara ketat sesuai dengan persyaratan instruksi pabrik mikroskop fluoresensi, dan jangan mengubah program sesuka hati.
(2) Pemeriksaan harus dilakukan di ruangan gelap. Setelah memasuki kamar gelap, sambungkan catu daya dan nyalakan lampu merkuri bertekanan sangat tinggi selama 5-15 menit. Setelah cahaya kuat dari sumber cahaya stabil, mata benar-benar beradaptasi dengan kamar gelap, lalu mulai mengamati spesimen.
(3) Untuk mencegah sinar ultraviolet merusak mata, kacamata pelindung harus dipakai saat menyesuaikan sumber cahaya.
(4) Waktu pemeriksaan sebaiknya 1-2 jam setiap kali. Jika melebihi 90 menit, intensitas cahaya dari lampu merkuri bertekanan sangat tinggi akan berkurang secara bertahap dan fluoresensi akan melemah; setelah spesimen disinari dengan sinar ultraviolet selama 3-5 menit, fluoresensi juga akan melemah secara signifikan; oleh karena itu, paling banyak tidak boleh melebihi 2-2 jam. 3 jam.
(5) Kehidupan sumber cahaya mikroskop fluoresensi terbatas, dan spesimen harus diperiksa secara kolektif untuk menghemat waktu dan melindungi sumber cahaya. Saat cuaca panas, kipas harus ditambahkan untuk menghilangkan panas, dan bola lampu baru harus dicatat dari awal waktu pemakaiannya. Bila Anda ingin menggunakannya lagi setelah lampu padam, Anda harus menunggu hingga bohlam cukup dingin sebelum menyalakannya. Hindari menyalakan sumber cahaya beberapa kali sehari.
(6) Amati spesimen segera setelah pewarnaan, karena fluoresensi secara bertahap akan melemah seiring waktu. Jika spesimen disimpan dalam kantong plastik polietilen pada suhu 4 derajat, waktu pelemahan fluoresensi dapat ditunda dan agen pemasangan dapat dicegah agar tidak menguap.
(7) Standar penilaian kecerahan fluoresensi: umumnya dibagi menjadi empat tingkat, yaitu, "satu" - tidak ada atau fluoresensi lemah yang dapat dilihat. " plus "—Hanya fluoresensi yang terlihat jelas yang dapat dilihat. " plus plus "—Terlihat dan cerah
