Prinsip dan Pengoperasian Mikroskop Darkfield
① Mikroskop medan gelap memiliki penahan buram di tengah kondensornya. Ini mencegah cahaya penerangan langsung memasuki lensa objektif; hanya cahaya yang dipantulkan dan didifraksikan oleh spesimen yang dikumpulkan. Akibatnya latar belakang bidang pandang tampak gelap sedangkan tepi spesimen terang. Mikroskop ini dapat menampilkan partikel halus sekecil 4–200 nm, dengan resolusi hingga 50 kali lebih tinggi dibandingkan mikroskop medan terang biasa.
② Prinsip Mikroskop medan gelap dimodifikasi dari mikroskop optik konvensional berdasarkan efek Tyndall. Kondensor medan gelap menghalangi sinar pusat dari sumber cahaya sehingga cahaya tidak dapat bergerak lurus ke atas melalui spesimen menuju objektif. Sebaliknya, cahaya dialihkan untuk menerangi spesimen secara miring. Spesimen memantulkan atau menghamburkan cahaya datang, dan cahaya yang tersebar memasuki objektif, menciptakan latar belakang gelap di seluruh bidang pandang.
③ Ruang Lingkup Penerapan Mikroskop lapangan gelap biasanya digunakan untuk mengamati spesimen transparan yang tidak diwarnai. Spesimen tersebut mempunyai indeks bias yang mendekati indeks bias medium sekitarnya dan sulit dibedakan dalam penerangan medan terang biasa. Penerangan bidang gelap meningkatkan kontras antara spesimen dan latar belakang. Ia dapat mendeteksi partikel hingga 4–200 nm. Namun, ini hanya menunjukkan keberadaan, pergerakan, dan fitur permukaan objek dan tidak dapat memperjelas struktur internalnya yang halus.
④ Prosedur Operasi
(1) Pasang kondensor medan gelap ke dudukan kondensor mikroskop.
(2) Gunakan sumber cahaya yang terang. Hindari cahaya langsung memasuki objektif; lampu mikroskop khusus umumnya digunakan.
(3) Tempatkan setetes minyak cedar di antara kondensor dan kaca objek. Hal ini mencegah pantulan cahaya internal total pada permukaan kondensor, yang jika tidak maka akan gagal menerangi spesimen untuk pengamatan medan gelap.
(4) Naikkan atau turunkan kondensor untuk memfokuskan berkas cahaya berbentuk kerucut ke spesimen. Jika kondensor dilengkapi dengan kontrol pergerakan dan pemusatan horizontal, lakukan pemusatan terlebih dahulu untuk menyelaraskan sumbu optik kondensor secara tepat dengan sumbu optik mikroskop. (5) Pilih objektif yang cocok dengan kondensor, sesuaikan fokus, dan tampilkan gambar spesimen target.
