Kelas Pencitraan Mikroskopi丨 Mikroskop Fluoresensi Bidang Luas
Dalam aplikasi pencitraan sel hidup, mikroskop fluoresensi medan lebar memfasilitasi pengamatan dinamika sel yang melekat yang tumbuh di ruang lingkungan tertentu yang ditempatkan pada tahap mikroskop. Dalam konfigurasinya yang paling dasar, mikroskop kultur jaringan terbalik standar yang dilengkapi dengan iluminasi fluoresensi EPI digabungkan dengan sistem detektor array area (biasanya kamera CCD), filter fluoresensi yang sesuai, dan sistem rana untuk membatasi paparan sel yang berlebihan terhadap cahaya Eksitasi yang berbahaya. . Mikroskopi fluoresensi dasar bergantung pada filter interferensi yang disesuaikan dengan hati-hati untuk memilih bandwidth spesifik untuk penerangan dan deteksi cahaya yang dipancarkan. Sumber cahaya termasuk merkuri, xenon, dan lampu busur halida logam, sistem laser pembesar sinar, dan dioda pemancar cahaya (LED), yang semuanya memerlukan spesifikasi filter yang berbeda. Fluorofor sintetis yang digunakan dalam mikroskop fluoresensi memiliki spektrum emisi yang mencakup daerah dekat-ultraviolet, tampak, dan dekat-inframerah. Penggunaan protein fluoresen yang dikodekan secara genetik telah sangat memperluas kemampuan mikroskop fluoresensi dalam pencitraan sel hidup, memungkinkan para peneliti untuk secara tepat menargetkan wilayah subselular yang diminati.
Nuohai LS 18, jenis baru mikroskop iluminasi lembaran cahaya yang dikembangkan secara independen oleh Nuohai, dirancang khusus untuk pencitraan 3D beresolusi tinggi dari sampel jaringan besar transparan, dan didedikasikan untuk mengeksplorasi berbagai jaringan utuh seperti otak, limpa, usus kecil ginjal, paru-paru, jantung, dan tumor. Struktur organ 3D yang tepat.
Dalam fluoresensi bidang lebar, emisi bukaan penuh yang dikumpulkan oleh tujuan mikroskop memaksimalkan sinyal yang direkam sambil meminimalkan waktu pemaparan yang diperlukan. Dengan demikian, sampel dapat dicitrakan dengan periode cahaya yang sangat singkat. Kerugian utama pencitraan bidang lebar adalah bahwa fluoresensi dari daerah yang jauh dari bidang fokus, serta sinyal latar belakang, adalah cahaya yang tidak diinginkan yang sering mengaburkan fitur yang menarik. Oleh karena itu, pencitraan bidang lebar menghasilkan hasil terbaik ketika fitur yang diinginkan berukuran besar (seperti organel) atau sangat belang-belang. Berbagai macam sampel sel hidup, termasuk sel yang melekat, bakteri, ragi, dan bagian jaringan yang sangat tipis, adalah kandidat ideal untuk pencitraan fluoresensi bidang luas, namun, jaringan yang lebih tebal (lebih dari 5 mikron) paling baik digunakan dengan metode pencitraan yang lebih canggih.
Meskipun ada banyak kemajuan dalam pencitraan fluoresen dengan pewarna fluoresen sintetik, titik kuantum, dan protein fluoresen, dalam beberapa kasus menggabungkan fluoresensi dengan modalitas pencitraan lainnya akan sangat membantu. Sebagai contoh, DIC dapat digunakan bersama dengan fluoresensi bidang lebar untuk memantau kelangsungan hidup sel dan morfologi umum sambil mempelajari fenomena yang menarik untuk target berlabel spesifik. Memperoleh DIC dan fluoresensi dalam satu gambar biasanya tidak praktis, tetapi dalam mikroskop yang dikonfigurasi dengan benar, kedua teknik tersebut dapat digunakan secara berurutan. Jadi, setelah pencitraan dalam mode epifluoresensi, gambar DIC dapat diperoleh dari sampel berlabel berfluoresensi menggunakan cahaya yang ditransmisikan. Kedua gambar dapat digabungkan selama pasca analisis. Akuisisi DIC dan gambar fluoresensi secara bersamaan dimungkinkan dalam konfigurasi mikroskop medan lebar canggih menggunakan pencahayaan yang dipisahkan secara spektral (seperti tampak dan inframerah dekat) dan adaptor kamera dua kamera atau tampilan terpisah. Dalam sebagian besar mikroskop confocal pemindaian laser, gambar dapat diperoleh dalam mode fluoresensi dan DIC secara bersamaan, menghilangkan kebutuhan untuk pemrosesan pasca-akuisisi. Kontras fase dan kontras modulasi Hoffman juga dapat digunakan bersamaan dengan mikroskop fluoresensi bidang lebar. Namun, dalam teknik ini, lensa objektifnya khusus, apakah itu cincin fase atau pelat modulasi Hoffman, akan menyebabkan hilangnya intensitas pancaran 5-15 persen .
Tautan artikel: Jaringan Peralatan Instrumen https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
