Penghitungan langsung mikroskop mikrobiologi
Prinsip eksperimental
Penghitungan langsung di bawah mikroskop menggunakan hemositometer merupakan metode penghitungan mikroba yang umum digunakan. Keuntungan dari metode ini adalah intuitif dan cepat. Tempatkan suspensi bakteri (atau suspensi spora) yang telah diencerkan dengan tepat di dalam ruang hitung antara kaca objek dan kaca penutup hemositometer, dan hitung di bawah mikroskop. Karena volume ruang hitung tetap (0.1mm2), maka dapat diubah menjadi jumlah total mikroorganisme per satuan volume sesuai dengan jumlah mikroorganisme yang diamati di bawah mikroskop. Karena metode ini menghitung jumlah bakteri hidup dan mati, maka disebut juga metode penghitungan total bakteri.
Hemositometer biasanya berupa slide kaca khusus di mana empat alur membentuk tiga platform. Platform di tengah dibagi menjadi dua bagian dengan alur horizontal pendek. Sebuah kisi terukir pada platform di setiap sisi. Setiap kotak dibagi menjadi sembilan kotak besar. Kotak besar di tengah adalah ruang hitung. Mikroorganisme dihitung dalam ruang hitung.
Skala ruang hitung umumnya memiliki dua spesifikasi, satu kotak besar dibagi menjadi 16 kotak tengah, dan setiap kotak tengah dibagi menjadi 25 kotak kecil (Gambar Ⅷ-2); yang lainnya adalah persegi besar Persegi dibagi menjadi 25 persegi tengah, dan setiap persegi tengah dibagi menjadi 16 persegi kecil (Gambar Ⅷ-1, C). Tapi apapun jenis papan hitungnya, jumlah kotak kecil di setiap kotak besar adalah sama, yaitu 16×25=400 kotak kecil.
Panjang sisi setiap persegi besar adalah 1 mm, dan luas setiap persegi besar adalah 1 mm2. Setelah kaca penutup ditutup, tinggi antara kaca slide dan kaca penutup adalah 0.1 mm, sehingga volume ruang hitung adalah 0.1mm3.
Saat menghitung, biasanya hitung jumlah total bakteri di lima kotak tengah, lalu dapatkan nilai rata-rata setiap kotak tengah, lalu kalikan dengan 16 atau 25 untuk mendapatkan jumlah total bakteri di kotak besar, lalu dikonversi menjadi jumlah total bakteri dalam 1 ml larutan bakteri.
Peralatan laboratorium
Hemositometer, mikroskop, kaca penutup, kapiler steril;
Bahan Eksperimen
suspensi Saccharomyces cerevisiae
Prosedur eksperimental (metode penghitungan langsung mikroskop mikroba)
1. pengenceran
Encerkan suspensi Saccharomyces cerevisiae dengan benar. Jika larutan bakteri tidak kental, tidak perlu diencerkan.
2. Ruang hitung mikroskopis
Sebelum menambahkan sampel, lakukan pemeriksaan mikroskopis pada ruang hitung pelat hitung. Jika ada kotoran, perlu dibersihkan sebelum dihitung.
3. tambahkan sampel
Tutupi pelat hemositometer yang bersih dan kering dengan kaca penutup, kemudian gunakan penetes mulut sempit yang steril untuk meneteskan sedikit larutan Saccharomyces cerevisiae yang telah diencerkan dari tepi kaca penutup (jangan terlalu banyak), agar larutan bakteri dekat dengan celah di sepanjang celah. Osmosis kapiler memasuki ruang hitung dengan sendirinya, dan ruang hitung umum dapat diisi dengan cairan bakteri. Berhati-hatilah agar tidak ada gelembung udara.
4. hitungan mikroskop
Setelah istirahat selama 5 menit, letakkan hemositometer di atas meja mikroskop, pertama gunakan lensa daya rendah untuk menemukan lokasi ruang hitung, lalu alihkan ke lensa daya tinggi untuk menghitung. Jika ditemukan larutan bakteri terlalu kental atau terlalu encer sebelum dihitung, perlu dilakukan pengaturan kembali pengenceran sebelum dihitung. Pengenceran sampel umum membutuhkan sekitar
5-10 sel cocok. Setiap ruang hitung memilih bakteri di 5 kisi tengah (opsional 4 sudut dan kisi tengah) untuk dihitung. Bakteri pada garis grid umumnya hanya dihitung pada garis atas dan kanan. Dalam kasus ragi bertunas, ketika ukuran tubuh tunas mencapai setengah dari sel induk, hitung dua bakteri. Hitung sampel untuk menghitung kandungan bakteri sampel dari nilai yang dihitung dalam dua ruang hitung.
5. Membersihkan Hemositometer
Setelah digunakan, bilas pelat penghitung sel darah di keran dengan jet air, jangan dicuci dengan benda keras, dan keringkan sendiri atau dengan pengering rambut setelah dicuci. Pemeriksaan mikroskopis, amati apakah terdapat sisa bakteri atau endapan lain pada setiap sel. Jika kurang bersih, harus dicuci berulang kali hingga bersih.
