Metode Pencitraan Bidang-Terang dan-Gelap dalam Mikroskop Fluoresensi
(1) Metode pencitraan medan terang (BFI), yang hanya memungkinkan berkas elektron yang ditransmisikan di daerah paraksial melewati bukaan objektif, membentuk gambar gelap dengan latar belakang terang. Semakin kecil bukaan bukaan objektif, semakin besar kontras gambar bidang terang; (2) Pencitraan medan gelap (DFI) adalah teknik yang memungkinkan hanya sebagian dari berkas hamburan sudut besar atau berkas difraksi tertentu dari kristal untuk melewati bukaan objektif, sekaligus menghalangi berkas yang ditransmisikan. Ini membentuk gambar grafis terang pada latar belakang gelap. Metode pencitraan medan gelap ini dapat meningkatkan kontras gambar dan merupakan teknik pencitraan yang penting.
Ada sekitar empat metode untuk mendapatkan gambar medan gelap menggunakan mikroskop fluoresensi Leica: (1) mempertahankan pencahayaan vertikal di sepanjang sumbu optik sambil menggerakkan bukaan objektif; (2) Penggunaan iluminasi miring untuk menangkap berkas tersebar searah sumbu optik disebut Central Dark Field Imaging (CDFI); (3) Bukaan obyektif dengan penghenti sinar pusat dan area transparan melingkar; (4) Gunakan lensa kondensor transparan melingkar untuk penginderaan cahaya dan bukaan melingkar tengah untuk lensa objektif. Metode * di sini adalah yang paling sederhana, namun menggunakan pencitraan elektronik di area lengan distal, sehingga aberasinya besar dan kualitas gambarnya kurang bagus. Metode kedua dapat menghindari kelemahan di atas, namun bukaan objektif mikroskop fluoresensi Leica hanya menerima sebagian kecil elektron terdifraksi yang tersebar, sehingga menghasilkan efisiensi yang lebih rendah. Sisi aperture sering kali terkena bombardir elektron dalam jumlah besar, yang dapat dengan mudah menyebabkan kontaminasi asimetris dan memengaruhi kualitas gambar. Lensa objektif annular telah diperbaiki dalam aspek ini, namun kelemahannya adalah sulit diproduksi dan sulit mencapai simetri aksial lengkap. Mengingat persyaratan yang relatif longgar untuk sistem pencahayaan, solusi terakhir dapat diadopsi, yang melibatkan penambahan bukaan melingkar pada kondensor untuk memberikan penerangan sinar berongga untuk sampel. Efek dari perangkat ini. Resolusi gambarnya bisa mendekati resolusi gambar bidang terang, sementara kontrasnya jauh lebih baik.
