Bagaimana Anda bisa memilih mikroskop confocal yang tepat untuk Anda? Apakah ada metode tertentu?
Mikroskopi confocal memiliki lebih banyak keuntungan daripada mikroskop widefield. Mikroskopi confocal dapat melakukan pemotongan sampel optik secara terus menerus dan mengecualikan gangguan sinyal dari bidang non-fokus. Untuk alasan ini, penerapan confocal microscopy memang lebih umum. Namun, ada semakin banyak mikroskop confocal di pasaran. Bagaimana cara memilih?
Mikroskopi confocal memiliki lebih banyak keuntungan daripada mikroskop widefield. Mikroskopi confocal dapat membuat bagian optik kontinu dari sampel dan mengecualikan gangguan sinyal dari bidang non-fokus. Untuk alasan ini, mikroskop confocal memang lebih umum. Namun, ada semakin banyak mikroskop confocal di pasaran. Bagaimana cara memilih? Saat memilih mikroskop confocal, ada dua pertimbangan dasar dan penting: jenis sampel yang ingin Anda pelajari (misalnya, sel tetap atau sel hidup), dan jenis pengujian yang ingin Anda lakukan (misalnya, proses seluler statis atau dinamis).
Pencitraan confocal sel tetap
Untuk mencitrakan sel atau jaringan yang tetap dan ternoda, kami biasanya memilih laser scanning confocal (LSCM). Hal ini terutama karena sel mati yang diperbaiki tidak memiliki peristiwa biologis yang cepat dalam sel hidup dan dapat memperoleh manfaat lebih baik dari resolusi spasial LSCM yang lebih tinggi. Pencitraan LSCM adalah untuk mengiris sampel secara optik dengan laser, dan kecepatan pemindaian (tergantung pada kecepatan cermin susunan pemindaian) umumnya 1fps. Waktu pemaparan yang lebih lama berarti risiko photobleaching yang lebih besar, tetapi untuk sel mati yang diperbaiki, waktu tidak kritis dan kami dapat meratakannya dengan mengambil banyak gambar.
Pencitraan confocal sel hidup
Pencitraan sel hidup membutuhkan perlindungan tambahan dari lingkungan yang tidak bersahabat. Saat pencitraan, pertimbangan pertama kami adalah menjaga kelangsungan hidup dan kesehatan sel. Elemen pemanas suhu konstan dan sistem perfusi sangat penting, terutama untuk studi selang waktu. Peristiwa biokimia cepat yang mengontrol keadaan fisiologis sel hidup adalah yang ingin dipelajari kebanyakan orang, tetapi peristiwa ini terlalu cepat untuk LSCM konvensional. Selain itu, kontak yang terlalu lama dengan LSCM juga menyebabkan kerusakan sel akibat sinar toksik. Oleh karena itu, pencitraan sel hidup memerlukan mikroskop confocal khusus.
Biasanya ada dua opsi untuk pencitraan confocal sel hidup: confocal pemindaian laser pemindaian cepat dan confocal disk berputar. Mikroskopi confocal pemindaian cepat menggantikan cermin galvanometer yang lebih lambat dengan cermin pemindaian resonansi yang lebih cepat, memungkinkan kecepatan pemindaian hingga 30fps; sementara confocals disk berputar (SDCM) memiliki keunggulan pemindaian yang lebih cepat (walaupun resolusi Spasial yang hilang), kecepatannya secara teoritis dapat mencapai 2000fps (dalam praktiknya seringkali dibatasi oleh faktor lain).
Jika Anda khawatir tentang photobleaching atau sinyal fluoresensi yang sangat lemah, maka SDCM mungkin lebih cocok. SDCM menggunakan dua cakram berputar dengan microwell tersusun untuk membubarkan cahaya eksitasi. Tidak seperti LSCM, yang memindai titik sampel, SDCM memperoleh banyak titik sekaligus (sekitar 100 titik piksel), sehingga kecepatannya sangat meningkat, dan photobleaching SDCM dan lebih sedikit fototoksisitas. Namun, Anda juga dapat menggunakan confocal pemindaian cepat untuk meningkatkan kecepatan pemindaian, dikombinasikan dengan detektor yang sangat sensitif, dan mengurangi energi cahaya eksitasi untuk mengurangi fototoksisitas, yang dapat mempertahankan fungsi confocal tradisional yang kaya.
Sistem pencitraan confocal otomatis
Beberapa peneliti suka menemukan cara untuk memodifikasi mikroskop agar sesuai dengan kebutuhan masing-masing. Dan beberapa peneliti bahkan tidak tertarik pada bagaimana sebenarnya mikroskop bekerja. Untuk yang terakhir, mikroskop confocal otomatis mungkin lebih sesuai dengan keinginan mereka. Misalnya, Olympus FluoViewFV10i adalah mikroskop confocal laser desktop yang sepenuhnya otomatis. Struktur terintegrasinya yang ringkas hampir tidak memerlukan ruang instalasi. Jenis instrumen ini ideal bagi peneliti yang perlu melakukan banyak akuisisi data citra setiap hari, tetapi tentu saja instrumen tersebut tidak sepenuhnya mencerminkan fungsionalitas dan fleksibilitas confocals tradisional. Selain itu, NikonA1 juga merupakan sistem confocal yang sepenuhnya otomatis. Seperti kebanyakan mikroskop pemindaian confocal konvensional, NikonA1 menggunakan kepala pemindai galvanometer, yang memiliki resolusi lebih tinggi daripada A1R dengan kepala pemindai hybrid, tetapi kecepatannya sedikit lebih lambat (A1R ~30fps)
