Pengamatan fluoresensi mikroskop optik
Fluoresensi mengacu pada proses di mana zat fluoresen memancarkan cahaya dengan panjang gelombang yang lebih panjang hampir bersamaan ketika disinari dengan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (Gambar 1). Ketika cahaya dengan panjang gelombang tertentu (panjang gelombang eksitasi) menyerang molekul, seperti pada fluorofor, energi foton diserap oleh elektron molekul. Selanjutnya, transisi elektron dari keadaan dasar (S0) ke tingkat energi yang lebih tinggi, keadaan tereksitasi (S1'). Proses ini disebut eksitasi①. Elektron tetap dalam keadaan tereksitasi selama 10-9–10-8 detik, selama itu elektron kehilangan sejumlah energi②. Selama proses elektron meninggalkan keadaan tereksitasi (S1) dan kembali ke keadaan dasar③, sisa energi yang diserap selama proses eksitasi dilepaskan.
Diagram Jablonski Fluorescent
Waktu tinggal molekul fluoresen dalam keadaan tereksitasi adalah masa pakai fluoresensi, yang umumnya pada tingkat nanodetik, dan merupakan karakteristik inheren dari molekul fluoresen itu sendiri. Pencitraan Seumur Hidup Fluoresensi (FLIM), yang menggunakan teknologi pencitraan seumur hidup fluoresensi, dapat melakukan pengukuran fungsional yang lebih mendalam selain pencitraan intensitas fluoresensi, dan memperoleh konformasi molekuler, interaksi antarmolekul, dan lingkungan mikro molekul, dll. Informasi yang sulit untuk diperoleh dengan pencitraan optik konvensional.
Properti penting lainnya dari fluoresensi adalah pergeseran Stokes, perbedaan panjang gelombang antara eksitasi dan puncak emisi (Gambar 2). Biasanya panjang gelombang emisi lebih panjang dari panjang gelombang eksitasi. Hal ini karena elektron akan kehilangan sebagian energinya melalui proses relaksasi setelah zat fluoresen tereksitasi dan sebelum melepaskan foton. Zat neon dengan pergeseran Stokes yang lebih besar lebih mudah diamati di bawah mikroskop fluoresensi.
mikroskop fluoresensi
Mikroskop fluoresensi adalah mikroskop optik yang menggunakan sifat fluoresensi untuk observasi dan pencitraan, dan banyak digunakan dalam berbagai bidang seperti biologi sel, neurobiologi, botani, mikrobiologi, patologi, dan genetika. Pencitraan fluoresensi memiliki keunggulan sensitivitas tinggi dan spesifisitas tinggi, dan sangat cocok untuk pengamatan distribusi protein dan organel spesifik dalam jaringan dan sel, studi kolokalisasi dan interaksi, pelacakan proses dinamis kehidupan seperti perubahan konsentrasi ion , dll.
Sebagian besar molekul dalam sel tidak berpendar, dan jika Anda ingin melihatnya, beri label dengan berpendar. Ada banyak metode pelabelan fluoresen, seperti pelabelan langsung (seperti menggunakan DAPI untuk melabeli DNA), atau pewarnaan imun menggunakan sifat pengikat antigen dari antibodi, atau menggunakan protein fluoresen (seperti GFP, protein fluoresen hijau) untuk melabeli protein target. , dan pengikatan reversibel. pewarna sintetis (seperti Fura-2), dll.
Mikroskop Fluoresensi Terbalik MF53-N
Saat ini, mikroskop fluoresensi telah menjadi peralatan pencitraan standar dari berbagai laboratorium dan platform pencitraan, dan merupakan penolong yang baik untuk eksperimen harian kita. Mikroskop fluoresensi terutama dibagi menjadi tiga kategori: mikroskop fluoresensi tegak (cocok untuk pemotongan), mikroskop fluoresensi terbalik (cocok untuk sel hidup, dengan mempertimbangkan pembagian), stereoskop fluoresen (cocok untuk spesimen yang lebih besar, seperti tumbuhan, ikan zebra (dewasa/embrio). ), medaka, organ tikus/tikus, dll.).
Teknologi pencitraan mikroskop fluoresensi banyak digunakan dan kaya akan jenis, dan teknologi baru masih muncul. Anda dapat memilih teknologi untuk menyelesaikan penelitian Anda sendiri.
