Mikroskop fluoresensi menggunakan metode dan tindakan pencegahan
Metode penggunaan:
(1) Tempatkan lembar bahan pada panggung pembawa.
(2) Nyalakan pengatur tegangan mikroskop fluoresensi. Kemudian tekan kelompok start untuk menyalakan lampu UV tidak boleh dimatikan selama 15 menit, dan tidak boleh dihidupkan kembali selama 3 menit setelah dimatikan.
(3) Putar filter eksitasi ke v, film dichroic ke v, pilih filter pemblokiran 495 atau 475nm.
(4) Pilih fluoresensi uvFL40, uvFL100 yang menerima mikroskop lensa objektif.
(5) Tambahkan minyak non-fluoresen pada kaca objek, pertama 40 x, dan kemudian 100 x mikroskop pemfokusan. Tunjukkan fluoresensi.
(7) Karena bahan fluoresen akibat iradiasi ultraviolet dengan pertumbuhan fluoresensi secara bertahap melemah seiring berjalannya waktu, maka pemeriksaan mikroskopis harus sering mengubah bidang pandang.
(8) juga dapat menggunakan bahan mikroskop pembesaran rendah uvFL10 atau uvFL20 (dengan pembesaran rendah tanpa menambahkan minyak non-fluoresen).
Metode perekaman gambar fluoresensi:
Gambar fluoresensi dilihat dengan mikroskop fluoresensi, yang satu dengan ciri morfologi, yang kedua dengan warna dan kecerahan fluoresensi, dalam menilai hasilnya, keduanya harus dipadukan dengan penilaian yang komprehensif. Hasilnya dicatat menurut indikator subjektif, yaitu dengan observasi visual oleh pekerja. Sebagai observasi kualitatif secara umum, pada dasarnya dapat diandalkan. Dengan berkembangnya teknologi dan ilmu pengetahuan, pada tingkat yang berbeda-beda, penggunaan indikator objektif untuk mencatat hasil penilaian, seperti penggunaan spektrofotometer sel, penganalisis gambar dan instrumen lainnya. Namun, hasil yang dicatat oleh instrumen-instrumen tersebut juga harus dipadukan dengan penilaian subjektif.
Teknologi fotografi mikroskop fluoresensi sangat diperlukan untuk merekam gambar fluoresensi, karena fluoresensi mudah memudar dan melemah, untuk merekam hasil fotografi secara instan. Caranya pada dasarnya sama dengan mikrografi biasa. Hanya perlu menggunakan film fotografi berkecepatan tinggi seperti ASA200 ke atas atau 24. ke atas. Karena sinar ultraviolet pada efek semburan fluoresensi, seperti penanda FITC, pada penyinaran sinar ultraviolet 30an, kecerahan fluoresensi berkurang sebesar 50%. Oleh karena itu, kecepatan eksposur terlalu lambat untuk menangkap gambar fluoresensi. Mikroskop fluoresensi penelitian umum memiliki perangkat sistem mikrofotografi semi-otomatis atau otomatis penuh.
Tindakan pencegahan:
(1) Operasikan sesuai dengan persyaratan manual pabrik mikroskop fluoresensi, jangan mengubah prosedur secara sewenang-wenang.
(2) Pemeriksaan sebaiknya dilakukan di kamar gelap. Setelah memasuki kamar gelap, sambungkan catu daya, nyalakan lampu merkuri bertekanan sangat tinggi selama 5-15menit, tunggu hingga sumber cahaya memancarkan cahaya yang kuat untuk stabil, dan mata sepenuhnya beradaptasi dengan kamar gelap, dan kemudian mulai mengamati spesimen.
(3) Untuk mencegah kerusakan mata akibat sinar ultraviolet, kacamata pelindung harus dipakai saat mengatur sumber cahaya.
(4) periksa waktu setiap kali hingga 1 ~ 2 jam sesuai, lebih dari 90 menit, intensitas cahaya lampu merkuri bertekanan sangat tinggi secara bertahap menurun, fluoresensi melemah; spesimen diiradiasi dengan sinar ultraviolet 3 ~ 5 menit, fluoresensi juga melemah secara signifikan; oleh karena itu, * tidak boleh lebih dari 2 ~ 3 jam.
(5) umur sumber cahaya mikroskop fluoresensi terbatas, spesimen harus diperiksa secara terpusat, untuk menghemat waktu dan melindungi sumber cahaya. Bila sudah panas, sebaiknya ditambahkan kipas pendingin, bohlam baru harus dicatat dari awal penggunaan waktu. Apabila lampu padam dan ingin digunakan kembali, bohlam harus didinginkan secukupnya sebelum dinyalakan. Sumber cahaya harus dihindari beberapa kali.
(6) Amati spesimen segera setelah pewarnaan, karena fluoresensi akan berkurang secara bertahap seiring berjalannya waktu. Jika spesimen ditempatkan dalam kantong plastik polietilen yang disimpan pada suhu 4 derajat, hal ini dapat menunda waktu melemahnya fluoresensi dan mencegah penguapan bahan penyegel.
(7) Kriteria penilaian kecerahan fluoresensi: umumnya dibagi menjadi empat tingkat, yaitu 'satu' - tidak ada atau terlihat fluoresensi lemah. '+' - hanya fluoresensi yang terlihat jelas. '+ +' - terlihat dengan terang
