Prinsip percobaan metode penghitungan langsung mikroskop mikroba
Penghitungan langsung di bawah mikroskop menggunakan hemositometer merupakan metode yang umum digunakan untuk menghitung mikroorganisme. Keuntungan metode ini adalah intuitif dan cepat. Tempatkan suspensi bakteri (atau suspensi spora) yang telah diencerkan dalam ruang hitung di antara kaca objek dan kaca penutup hemositometer, dan hitung di bawah mikroskop. Karena volume ruang hitung tetap (0.1 mm2), volume tersebut dapat diubah menjadi jumlah total mikroorganisme per satuan volume berdasarkan jumlah mikroorganisme yang diamati di bawah mikroskop. Karena metode ini menghitung jumlah total bakteri hidup dan mati, maka disebut juga metode penghitungan bakteri total.
Hemositometer biasanya berupa slide khusus dengan empat slot yang membentuk tiga platform. Platform tengah dibagi menjadi dua bagian oleh alur horizontal pendek. Ada kotak persegi yang terukir pada platform di setiap sisinya. Setiap kotak persegi dibagi menjadi sembilan kotak besar. Kotak besar di tengah adalah ruang hitung. Penghitungan mikroorganisme dilakukan di ruang hitung. Struktur hemositometer ditunjukkan pada Gambar Ⅷ-1.
Skala ruang hitung umumnya memiliki dua spesifikasi. Satu adalah kotak besar yang dibagi menjadi 16 kotak sedang, dan setiap kotak sedang dibagi menjadi 25 kotak kecil (Gambar Ⅷ-2); yang lainnya adalah kotak besar. Kotak persegi dibagi menjadi 25 kotak sedang, dan setiap kotak sedang dibagi menjadi 16 kotak kecil (Gambar VIII-1, C). Namun apapun jenis papan hitungnya, jumlah kotak kecil pada setiap kotak besar tetap sama, yaitu 16×25=400 kotak kecil, seperti terlihat pada Gambar Ⅷ-2.
Panjang sisi setiap persegi besar adalah 1 mm, jadi luas setiap persegi besar adalah 1 mm2. Setelah kaca penutup ditutup, tinggi antara kaca objek dan kaca penutup adalah 0.1mm, sehingga volume ruang hitung adalah 0.1mm3.
Saat menghitung, biasanya hitung jumlah total bakteri dalam lima kotak sedang, lalu cari nilai rata-rata setiap kotak tengah, lalu kalikan dengan 16 atau 25 untuk mendapatkan jumlah total bakteri dalam kotak besar, lalu hitung Konversikan ke jumlah total bakteri dalam 1ml larutan bakteri.
