Penentuan jumlah mikroorganisme-Metode penghitungan langsung mikroskopis!
Pertumbuhan populasi bakteri diwujudkan dengan peningkatan jumlah sel atau peningkatan materi seluler. Metode penentuan jumlah sel meliputi penghitungan mikroskopis langsung, penghitungan pelat, estimasi kekeruhan dengan spektrofotometer, bilangan MPN yang paling mungkin, dan filtrasi membran. (filtrasi membran) dll. Metode pengukuran zat seluler meliputi penentuan berat kering sel, penentuan komponen sel tertentu seperti kandungan nitrogen, kandungan RNA dan DNA, serta penentuan produk metabolit. Singkatnya, ada banyak metode untuk mengukur pertumbuhan mikroba, masing-masing memiliki kelebihan dan kekurangannya sendiri. Metode ini harus dipilih sesuai dengan kebutuhan spesifik pekerjaan. Eksperimen ini terutama memperkenalkan metode penghitungan langsung mikroskop yang biasa digunakan dalam produksi dan penelitian ilmiah.
1. Persyaratan tujuan
1. Memperjelas prinsip penghitungan dengan papan hitung sel darah.
2. Menguasai metode penghitungan mikroorganisme menggunakan papan hitung sel darah.
2. Prinsip dasar
Metode penghitungan langsung mikroskop adalah metode sederhana, cepat dan intuitif yang menempatkan sejumlah kecil suspensi sampel yang akan diuji pada slide khusus dengan luas dan volume yang ditentukan (disebut juga bakteriometer) dan menghitungnya langsung di bawah mikroskop. Metode. Saat ini, bakteriometer yang umum digunakan di dalam dan luar negeri antara lain: hemositometer, bakteriometer Peteroff-Hauser, dan bakteriometer Hawksley, dll. Semuanya dapat digunakan untuk menghitung ragi, bakteri, spora jamur, dan suspensi lainnya, dan prinsip dasarnya sama. Dua penghitung bakteri terakhir memiliki volume total 0.02mm3 setelah ditutup dengan kaca penutup, dan jarak antara kaca penutup dan kaca objek hanya 0,02 mm. Oleh karena itu, lensa objektif perendaman minyak dapat digunakan untuk mengamati dan mendeteksi sel yang lebih kecil seperti bakteri. menghitung. Selain menggunakan bakteriometer tersebut, ada juga metode estimasi yang mengamati langsung perbandingan luas apusan dengan luas lapang pandang di bawah mikroskop. Metode ini umumnya digunakan untuk pemeriksaan bakteriologis susu. Keuntungan metode penghitungan langsung mikroskop adalah intuitif, cepat, dan mudah dioperasikan. Namun kelemahan metode ini adalah hasil pengukuran biasanya berupa penjumlahan bakteri mati dan bakteri hidup. Saat ini ada beberapa metode untuk mengatasi kekurangan ini, seperti menggabungkan bakteri hidup yang mewarnai kultur ruang mikro (waktu singkat) dan menambahkan inhibitor pembelahan sel untuk mencapai tujuan menghitung hanya bakteri yang hidup.
Percobaan ini menggunakan hemositometer sebagai contoh untuk melakukan penghitungan langsung di bawah mikroskop. Untuk penggunaan dua bakteriometer lainnya, silakan mengacu pada petunjuk dari masing-masing produsen. Penghitungan langsung di bawah mikroskop menggunakan hemositometer merupakan metode pencacahan mikroba yang umum digunakan. Papan hitung adalah perosotan khusus dengan empat alur yang membentuk tiga platform; platform yang lebih luas di tengah dibagi menjadi dua bagian dengan alur horizontal pendek, dan terdapat kisi-kisi di setiap sisi platform. Setiap kotak persegi dibagi menjadi sembilan kotak besar, dan kotak besar di tengahnya adalah ruang hitung. Struktur papan hitung sel darah ditunjukkan pada Gambar {{0}}. Umumnya ada dua spesifikasi untuk skala ruang hitung. Satu kotak besar dibagi menjadi 25 kotak sedang, dan setiap kotak sedang dibagi menjadi 16 kotak kecil (Gambar 15-2); yang lainnya adalah kotak besar. Kotak persegi dibagi menjadi 16 kotak sedang, dan setiap kotak sedang dibagi menjadi 25 kotak kecil. Namun, apa pun jenis papan hitungnya, ada 400 kotak kecil di setiap kotak besar. Panjang sisi setiap persegi besar adalah lmm, maka luas setiap persegi besar adalah lmm2. Setelah kaca penutup ditutup, maka tinggi antara kaca penutup dan kaca objek adalah 0,lmm, sehingga volume ruang hitung adalah 0,lmm3 (sepersepuluh ribu mililiter). Gambar 15-1 Struktur papan hitung sel darah (1) Gambar 15-2 Struktur papan hitung sel darah (2) A. Tampak depan; B.bagian memanjang; kotak persegi yang diperbesar, kotak besar di tengahnya adalah ruang hitung 1. Papan hitung sel darah; 2. Kaca penutup; 3. Saat menghitung di ruang hitung, biasanya menghitung jumlah total bakteri dalam lima kotak, kemudian mencari nilai rata-rata setiap kotak, lalu dikalikan dengan 25 atau 16 untuk mendapatkan Jumlah total bakteri dalam satu kotak besar kemudian dikonversi menjadi jumlah total bakteri dalam 1 ml larutan bakteri. Misalkan jumlah seluruh bakteri dalam lima kotak tengah adalah A, dan faktor pengenceran larutan bakteri adalah B. Jika merupakan pelat hitung dengan 25 kotak tengah, maka jumlah seluruh bakteri dalam 1mL larutan bakteri adalah {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (potongan) Dengan cara yang sama, jika itu adalah pelat hitung dengan 16 kotak, jumlah total bakteri dalam 1mL larutan bakteri {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (potongan),,
