Penentuan populasi mikroba - metode penghitungan mikroskopis langsung!
I. Persyaratan Tujuan
1, Untuk memperjelas prinsip penghitungan pelat hematokrit.
2,Kuasai metode penghitungan mikroba menggunakan pelat hematokrit.
II. Prinsip dasar
Metode penghitungan langsung mikroskop adalah sejumlah kecil suspensi sampel yang akan diuji pada kaca objek khusus dengan luas dan volume tertentu (juga dikenal sebagai penghitung bakteriologis), dalam mikroskop penghitungan langsung merupakan metode yang sederhana, cepat, dan intuitif. Saat ini, penghitung bakteriologis yang umum digunakan di dalam dan luar negeri adalah: pelat penghitung sel darah, penghitung bakteriologis Peteroff-Hauser dan penghitung bakteriologis Hawksley, dll., yang dapat digunakan untuk ragi, bakteri, spora jamur dan suspensi penghitungan lainnya, prinsip dasarnya adalah sama. Dua jenis penghitung terakhir memiliki volume total 0.02mm3 setelah kaca penutup dipasang, dan jarak antara kaca penutup dan irisan pembawa hanya 0,02 mm, sehingga sel lebih kecil seperti bakteri dapat diamati dan dihitung dengan objektif minyak imersi. Selain penggunaan counter tersebut, juga terdapat metode estimasi perbandingan luas noda terhadap luas bidang pandang yang diamati langsung di bawah mikroskop, yang umumnya digunakan untuk pemeriksaan bakteriologis susu sapi. Keuntungan metode penghitungan mikroskop langsung adalah intuitif, cepat dan mudah dioperasikan. Namun kelemahan metode ini adalah hasilnya biasanya berupa penjumlahan organisme mati dan organisme hidup. Ada beberapa metode untuk mengatasi kelemahan ini, seperti kombinasi kultur ruang mikro yang diwarnai dengan bakteri hidup (waktu singkat) dan penambahan inhibitor sitokinesis untuk mencapai tujuan penghitungan hanya organisme hidup.
Langkah-langkah operasi
1, Persiapan suspensi bakteri
Gunakan larutan garam steril untuk membuat suspensi bakteri ragi bir dengan konsentrasi yang sesuai.
2, Ruang penghitungan cermin
Sebelum menambahkan sampel, ruang hitung pada pelat hitung harus diperiksa terlebih dahulu. Jika ada kotoran, perlu dibersihkan dan dikeringkan sebelum dihitung.
3, Menambahkan sampel
Piring hitung sel darah yang bersih dan kering ditutup dengan kaca penutup, kemudian gunakan buret kapiler steril untuk mengocok suspensi ragi pembuat bir dari tepi kaca penutup hingga setetes kecil, sehingga cairan bakteri sepanjang celah melalui penetrasi kapiler ke dalam ruang hitung secara otomatis, umumnya ruang hitung dapat diisi dengan cairan bakteri. Saat mengambil sampel, larutan bakteri harus dikocok terlebih dahulu; saat menambahkan sampel, ruang penghitungan tidak boleh memiliki gelembung udara.
4, penghitungan mikroskop
Setelah sampel dimasukkan, diamkan selama 5 menit, kemudian letakkan pelat hitung sel darah pada panggung pembawa mikroskop, cari dulu letak ruang hitung dengan perbesaran rendah, kemudian ubah ke perbesaran tinggi untuk penghitungan. Sesuaikan intensitas cahaya mikroskop dengan tepat, untuk mikroskop dengan reflektor cahaya juga harus memperhatikan cahaya tidak boleh bias ke satu sisi, jika tidak bidang pandang tidak mudah untuk membersihkan garis kisi ruang hitung, atau hanya melihat garis vertikal atau hanya melihat garis horizontal. Jika cairan bakteri ditemukan terlalu kental atau terlalu encer sebelum dihitung, pengenceran perlu disesuaikan kembali sebelum dihitung. Persyaratan pengenceran sampel umum sekitar 5 hingga 10 bakteri di setiap sel sudah sesuai. Untuk setiap ruang hitung, organisme di 5 kompartemen tengah (4 sudut dan satu kompartemen tengah di tengah) dipilih untuk dihitung. Organisme yang terletak pada garis grid biasanya hanya dihitung pada garis atas dan kanan. Dalam kasus pertunasan ragi, ketika tubuh pertunasan mencapai setengah ukuran sel induk, itu dihitung sebagai dua organisme. Menghitung sampel dari dua ruang hitung dalam nilai rata-rata untuk menghitung kandungan bakteri dalam sampel.
5. Membersihkan pelat hematokrit
Setelah digunakan, bilas pelat penghitung sel darah dengan air di bawah keran, jangan gunakan benda keras untuk mencuci dan menyikat, mengeringkannya sendiri atau menggunakan pengering rambut untuk mengeringkannya setelah dicuci. Periksa secara mikroskopis pelat untuk melihat apakah ada sisa organisme atau endapan lain di setiap kompartemen. Jika kurang bersih maka pencucian harus diulangi sampai bersih.
