Perbandingan mikroskop confocal dan mikroskop optik biasa
Mikroskop merupakan alat utama untuk mengamati sel. Tergantung pada sumber cahayanya, mikroskop dapat dibagi menjadi dua kategori: mikroskop optik dan mikroskop elektron. Yang pertama menggunakan cahaya tampak (mikroskop ultraviolet hingga sinar ultraviolet) sebagai sumber cahaya, sedangkan yang kedua menggunakan berkas elektron sebagai sumber cahaya. Mikroskop optik biasa dan mikroskop confocal laser termasuk dalam mikroskop optik yang sama.
I. Mikroskop Optik Umum
Mikroskop biologi biasa terdiri dari tiga bagian, yaitu: ① sistem penerangan, termasuk sumber cahaya dan kondensor; ② sistem perbesaran optik, terdiri dari objektif dan lensa mata, adalah bagian utama mikroskop, untuk menghilangkan aberasi bola dan aberasi kromatik, lensa mata dan objektif terdiri dari kelompok lensa yang kompleks; ③ perangkat mekanis, digunakan untuk memperbaiki material dan observasi kenyamanan.
Objek mikroskop yang jelas tidak hanya ditentukan oleh perbesaran, tetapi juga dengan daya pisah (resolusi) mikroskop, daya pisah mengacu pada mikroskop (atau mata manusia dari sasaran 25cm) dapat membedakan objek zui interval kecil kemampuan untuk membedakan besar kecilnya daya pisah ditentukan oleh panjang gelombang cahaya dan kecepatan mulut cermin serta indeks bias medium, dinyatakan dalam rumus :
R=0.61λ /NANA=nsin /2 dimana: n=indeks bias medium;=sudut mulut cermin (spesimen pada mulut lensa objektif sudut tarik), NA=kecepatan mulut cermin (bukaan numerik). Sudut mulut cermin selalu kurang dari 180°, sehingga nilai zui sina/2 harus kurang dari 1.
Indeks bias kaca yang digunakan dalam produksi lensa optik adalah 1,65~1,78, indeks bias medium yang digunakan semakin dekat ke kaca semakin baik. Untuk lensa obyektif kering, medium udara, kecepatan mulut cermin umumnya 0.05 ~ 0,95; lensa minyak dengan minyak cedar sebagai medianya, kecepatan mulut cermin bisa mendekati 1,5.
Panjang gelombang cahaya biasa 400~700nm, sehingga nilai daya pisah mikroskop tidak akan kurang dari 0,2μm, daya pisah mata manusia adalah 0,2mm, sehingga desain umum mikroskop zui pembesaran biasanya 1000X.
Kedua, mikroskop pemindaian confocal laser
Mikroskop pemindaian confocal laser (mikroskop pemindaian confocal laser), dengan laser sebagai sumber cahaya pemindaian, titik demi titik, garis demi garis, pencitraan pemindaian cepat permukaan demi permukaan, laser pemindaian dan kumpulan fluoresensi dari tujuan umum, titik fokus laser pemindaian objektif , tetapi juga pencitraan sesaat dari titik objek. Karena panjang gelombang sinar laser lebih pendek, sinarnya sangat halus, sehingga mikroskop pemindaian laser confocal memiliki resolusi tinggi, sekitar 3 kali lipat dari mikroskop optik biasa. Sistem difokuskan satu kali dan pemindaian dibatasi pada satu bidang sampel. Ketika kedalaman pemfokusan tidak sama, gambar dengan tingkat kedalaman sampel yang berbeda dapat diperoleh, dan informasi gambar ini disimpan di komputer, melalui analisis dan simulasi komputer, dapat menunjukkan struktur tiga dimensi sampel sel. .
