Persiapan dan Pengamatan Sampel Biologis Menggunakan Mikroskop Elektron
Resolusi mikroskop tergantung pada panjang gelombang cahaya yang digunakan. Mikroskop elektron, yang muncul pada tahun 1933, menggunakan berkas elektron dengan panjang gelombang yang jauh lebih pendek daripada cahaya tampak sebagai sumber cahayanya. Ini sangat meningkatkan resolusinya dibandingkan dengan mikroskop optik. Perbedaan sumber cahaya juga menyebabkan serangkaian perbedaan antara mikroskop elektron dan mikroskop optik.
Berdasarkan perbedaan prinsip pencitraan berkas elektron dan cara berkas berinteraksi dengan sampel, mikroskop elektron modern telah berkembang menjadi banyak jenis. Yang paling umum digunakan adalah mikroskop elektron transmisi (TEM) dan mikroskop elektron pemindaian (SEM). Perbesaran total TEM dapat berkisar antara 1000 hingga 1.000.000 kali, sedangkan SEM berkisar antara 20 hingga 300.000 kali. Eksperimen ini terutama memperkenalkan persiapan sampel untuk mikroskop elektron transmisi dan pemindaian mikroskop elektron.
II. Peralatan dan Bahan
Tekanan:Escherichia colibudaya miring
Larutan dan reagen: Formvar, asam sulfat pekat, etanol absolut, air steril, larutan natrium fosfotungstat berair 2% (pH 6,5–8,0), larutan polivinil formal 0,3% (dilarutkan dalam kloroform), sitokrom C, amonium asetat, plasmid pBR322.
Instrumen dan perlengkapan: Mikroskop optik konvensional, kisi-kisi tembaga, corong Buchner, gelas kimia, cawan petri, penetes steril, tang steril, jarum bedah, kaca objek, hemositometer, evaporator vakum, pengering titik kritis, dll.
AKU AKU AKU. Prosedur Operasi
(1) Persiapan Sampel dan Pengamatan Mikroskop Elektron Transmisi
Perawatan kisi-kisi logam Sampel untuk mikroskop optik diamati pada slide kaca. Namun, untuk mikroskop elektron transmisi, elektron tidak dapat menembus kaca, sehingga digunakan substrat mesh, yang umumnya dikenal sebagai grid spesimen. Kisi spesimen tersedia dalam berbagai spesifikasi sesuai bahan dan bentuk. Jaringan tembaga dengan ukuran 200–400 mesh adalah yang paling banyak digunakan. Jaringan tembaga harus dibersihkan sebelum digunakan untuk menghilangkan kontaminan, jika tidak, kualitas film pendukung dan kejernihan mikrograf spesimen akan terpengaruh. Eksperimen ini menggunakan kisi-kisi tembaga 400 mesh, dengan perlakuan sebagai berikut: pertama rendam dalam larutan Formvar selama beberapa jam, bilas berulang kali dengan air suling, kemudian dehidrasi dengan merendamnya dalam etanol absolut. Jika kisi-kisi tetap kotor setelah langkah di atas, rendam dalam asam sulfat pekat encer (1:1) selama 1–2 menit, atau rebus dalam larutan NaOH 1% selama beberapa menit. Bilas hingga bersih dengan air suling, dehidrasi dalam etanol absolut, dan sisihkan untuk digunakan nanti.
