Mikroskop biologis mengenai volume blok jaringan
Mikroskop biologis Sejauh ini, fiksasi dingin, pemotongan ultra tipis beku dan pengeringan beku merupakan metode rutin untuk pemotongan mikro jaringan dan sel dengan sinar X. Berikut rincian metode ini:
Mikroskop biologi. Untuk mikroskop dengan kondensor, kondensor dapat digerakkan ke atas dan ke bawah untuk mencapai kecerahan sedang. Selain itu, bukaan dioda pemancar cahaya variabel dapat diubah untuk mencapai kecerahan sedang 9b. Jika cahayanya terang, kondensor dapat dinaikkan dengan tepat dan bukaan cahaya variabel dapat diperbesar dengan tepat. Jika cahayanya terlalu kuat, kondensor dapat diturunkan dengan tepat dan bukaan berkas cahaya silang dapat dikurangi dengan tepat. Jika Anda masih merasa terpesona dalam situasi ini, Anda dapat memilih filter yang sesuai dan meletakkannya pada braket di bawah kondensor. Dengan cara ini Anda bisa mendapatkan kecerahan yang memuaskan Anda. Tentu saja, diperlukan waktu latihan tertentu untuk mendapatkan pengalaman dalam mengatur posisi atas dan bawah kondensor untuk mencapai ukuran bukaan variabel dan memilih filter yang sesuai.
Masalah yang sangat penting dalam mikroskop biologis adalah bahwa selama proses pengumpulan dan pemisahan sel, setelah pengeringan beku dan penanaman resin (FD), setelah pembekuan pelet ultra-tipis, dan setelah pengeringan beku, kandungan 65 elemen setiap bagian harus dianalisis dengan sangat hati-hati, dan sama sekali tidak merusak sel yang akan dianalisis. Karena analisis area mikro sinar-X tidak hanya melibatkan banyak langkah, tetapi juga membutuhkan biaya yang besar. Jika setelah sekian lama dan beberapa langkah, sel yang dianalisis adalah sel rusak atau sel mati, sayang sekali jika mengambil kesimpulan yang salah. Misalnya, kardiomiosit yang diisolasi setelah pengobatan kolagenase memiliki dua bentuk, yang satu berbentuk batang panjang dan yang lainnya berbentuk bulat. Yang terakhir adalah sel-sel sekarat yang rusak selama isolasi sel.
Mikroskop Biologis Kandungan dan distribusi elektrolit pada kedua jenis sel ini sangat berbeda. Na sangat tinggi dan K sangat rendah pada kardiomiosit bulat, dan konsentrasi Ca pada cabang linier sangat tinggi. Setelah dilakukan pengecekan dengan metode analisis lain, terbukti bahwa tingginya Na dan rendahnya K pada sel bulat serta tingginya Ca pada mitokondria disebabkan oleh rusaknya membran sel pada proses pemisahan sel. Metode fiksasi dingin pada sel dan jaringan sering kali adalah dengan memadamkan dan memperbaikinya terlebih dahulu, lalu menyimpannya dalam nitrogen cair. Pendinginan dan fiksasi sangat penting untuk efek pelestarian. Sel hidup atau jaringan segar kaya akan air. Saat pendinginan, bagian sel atau jaringan yang bersentuhan langsung dengan kriogen (terutama saat pendinginan dengan nitrogen cair) terlebih dahulu dibekukan dan difiksasi, sehingga membentuk "cangkang", yang menghalangi bagian tengah sel dihancurkan. dan difiksasi dengan dingin. Oleh karena itu, ketika melakukan analisis area mikro garis X, sering ditemukan adanya kristal es di tengah sel yang lebih besar. Untuk mencegah hal ini terjadi, zat dengan titik leleh lebih tinggi dari nitrogen cair tetapi kekeringan lebih rendah -806c digunakan sebagai zat pendingin yang dihancurkan. Ada banyak zat seperti itu, tetapi yang paling mudah dan termurah adalah propana pekat (titik didih - 42.120c, titik leleh - 187.10c, berat molekul 44.1), dan laju pendinginannya juga paling cepat. Namun kelemahannya adalah mudah terbakar.
Mikroskop biologis dapat menempatkan serat otot pada kerangka khusus. Ketika kontraksi serat otot mencapai fase tertentu dan perlu diperbaiki, nosel segera dimulai untuk menyemprotkan cairan propana ke serat otot untuk memadamkan dan memperbaikinya. Kemudian serat otot beserta rangkanya dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam nitrogen cair. Jika sel darah atau sel yang terpisah sudah terpasang, sentrifugasi terlebih dahulu dengan kecepatan rendah untuk memekatkan sel, pindahkan sel ke tabung perak kecil dengan konduktivitas termal yang baik, masukkan tabung ke dalam propana cair dan bekukan untuk memperbaikinya. Saat memasang pankreas tikus di laboratorium Hall, pertama-tama dinginkan kedua balok baja dengan helium cair (atau nitrogen cair), jepit kedua balok tembaga dengan tang, dan letakkan sebelum dan sesudah pankreas untuk memadamkan dan memperbaiki kelenjar rahim. . Jaringan atau sel dapat dipadamkan dan difiksasi lalu dipindahkan ke nitrogen cair untuk penyimpanan jangka panjang.
