Penerapan Mikroskopi Fluoresensi Refleksi Internal Total Fluoresensi
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), mikroskop fluoresensi refleksi internal total, ketika cahaya memasuki media dengan indeks bias lebih rendah dari media dengan indeks bias tinggi, jika sudut datang cukup besar, semua cahaya dipantulkan tanpa pembiasan, tetapi di Antarmuka kedua media menghasilkan gelombang cepat berlalu dr ingatan yang dapat membangkitkan fluoresensi dalam jarak 100nm di dekat antarmuka untuk mewujudkan pengamatan permukaan objek. Cahaya eksitasi dapat dikirim melalui iluminator mikroskop fluoresensi konvensional atau iluminator khusus, dan sudut datangnya laser dapat dikontrol. Metode eksitasi medan sesaat digunakan untuk mencegah cahaya eksitasi memasuki detektor. Cahaya eksitasi pada antarmuka antara kaca dan air menghasilkan internal penuh yang diimplementasikan oleh refleksi. Karena redaman eksponensial dari cahaya eksitasi, hanya area sampel yang sangat dekat dengan permukaan pantulan total yang akan menghasilkan pantulan fluoresensi, yang sangat mengurangi interferensi kebisingan cahaya latar ke target pengamatan, sehingga teknologi ini banyak digunakan dalam pengamatan dinamis. dari substansi permukaan sel.
Diagram skematis mikroskop fluoresensi refleksi internal total (TIRFM)
①Sampel ②Jangkauan gelombang cepat berlalu ③Kaca penutup ④Oil imersi ⑤Target ⑥Sinyal emisi (sinyal) ⑦Sinyal eksitasi
Untuk mencapai refleksi internal total, diperlukan sudut insiden yang besar, misalnya, sudut insiden pada antarmuka kaca-air lebih besar dari 61 derajat. Ini dapat dicapai dengan prisma, yang disebut TIRFM berbasis prisma, atau dengan lensa objektif dengan apertur numerik tinggi, yang disebut TIRFM tipe objektif. Mikroskop fluoresensi refleksi internal total komersial saat ini umumnya dari jenis lensa objektif, dengan kecepatan tinggi dan presisi tinggi.
Mikroskopi fluoresensi refleksi internal total banyak digunakan di beberapa bidang biologi karena dapat mewujudkan pengamatan fluoresensi dalam rentang yang sangat tipis (kurang dari 100nm) pada permukaan objek. Seperti aplikasi berikut ini:
Pengamatan gambar permukaan sel: struktur permukaan membran sel, kontak permukaan sel, dinamika permukaan membran/lokalisasi protein.
Pengamatan dan manipulasi molekul tunggal: myosin, aktin, dan Cy3-berlabel ATP.
Pergerakan permukaan membran sel: seperti penelanan vesikel, ekshalasi vesikel, dan eksokrin vesikel. itu
Pengamatan fenomena pencetus kalsium pada membran sel, pemantauan saluran ion.
Penelitian motor molekuler: motor rotasi, protein sitoskeletal, polimer, protein G, protein cincin, motor nukleotida.
Selain bidang biologi, ini juga memiliki aplikasi yang baik di bidang kimia untuk pengamatan struktur molekul kimia.
