Struktur dasar mikroskop fluoresensi confocal
(1) Modul pemindaian
Modul pemindaian terutama terdiri dari bilah lampu lubang jarum (mengontrol ketebalan irisan optik), spektroskop (mengubah arah rambat cahaya sesuai panjang gelombang), kolorimeter fluoresensi emisi (memilih cahaya dalam rentang panjang gelombang tertentu untuk dideteksi), dan detektor (tabung photomultiplier). Fluoresensi campuran dalam sampel fluoresen memasuki pemindai, dan setelah dipilih oleh bilah lampu lubang jarum pendeteksi, spektrometer, dan kolorimeter, fluoresensi tersebut dibagi menjadi berbagai fluoresensi monokromatik, yang dideteksi dalam saluran fluoresensi berbeda dan membentuk gambar confocal yang sesuai. Pada saat yang sama, beberapa gambar fluoresensi monokromatik paralel dan gambar kompositnya dapat ditampilkan di layar komputer.
(2) Sistem mikroskop fluoresensi
Mikroskop merupakan komponen utama LSCM yang berhubungan dengan kualitas pencitraan sistem. Jalur optik mikroskop dapat dengan mudah dimasukkan ke dalam sistem optik yang jauhnya jauh dengan opsi optik tanpa mempengaruhi kualitas gambar dan akurasi pengukuran. Sasarannya harus berupa sasaran apokromatik bidang datar bukaan numerik besar, yang bermanfaat untuk perolehan fluoresensi dan pencitraan yang jelas. Konversi kelompok lensa objektif, pemilihan kelompok filter warna, penyesuaian gerakan panggung, dan penguncian memori bidang fokus semuanya harus dikontrol secara otomatis oleh komputer.
Mikroskop fluoresensi yang digunakan pada mikroskop confocal pemindaian laser umumnya sama dengan mikroskop fluoresensi konvensional, namun memiliki ciri khas tersendiri: perlu disambungkan ke pemindai, sehingga laser dapat masuk ke objektif mikroskop untuk menyinari sampel dan membuat fluoresensi yang dipancarkan sampel mencapai detektor; Diperlukan perangkat konversi jalur cahaya, yang mengubah lampu merkuri menjadi laser, dan intensitas cahaya lampu merkuri dapat disesuaikan.
(3) Laser umum
Sumber laser yang digunakan dalam mikroskop confocal pemindaian laser mencakup sistem laser tunggal dan multi laser, dan laser yang umum digunakan mencakup tiga jenis berikut:
Laser semikonduktor: 405nm (dekat garis spektral ultraviolet)
Laser ion argon: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (lampu hijau biru)
Laser He-Ne: 543nm (lampu hijau laser hijau He-Ne) 633nm (laser merah He-Ne lampu merah)
Laser UV (laser UV): 351 nm, 364 nm (sinar UV)
(4) Peralatan bantu
Sistem pendingin berpendingin udara, berpendingin air, dan pasokan listrik yang diatur.
Prinsip kerja dasar mikroskop confocal pemindaian laser adalah pertama-tama memancarkan cahaya eksitasi dengan panjang gelombang tertentu dari laser. Setelah amplifikasi, cahaya melewati bilah lampu lubang jarum yang menyala di pemindai untuk membentuk sumber cahaya titik. Lensa objektif berfokus pada bidang fokus sampel, dan titik iluminasi yang sesuai pada sampel tereksitasi dan memancarkan fluoresensi. Setelah melewati bilah lampu lubang deteksi, ia mencapai detektor dan digambarkan di layar pemantauan komputer. Dengan cara ini, gambar confocal lengkap dibentuk oleh gambar fluoresensi setiap titik sampel pada bidang fokus, yang disebut irisan cahaya.
