Mengapa perbesaran lensa minyak lebih besar daripada lensa objektif biasa?
Alasan mengapa bakteri perlu difiksasi sebelum pewarnaan pada percobaan mikrobiologi:
1: Membunuh sel, mudah diwarnai dengan pewarna.
2: Buat bakteri menempel pada slide kaca, dan tidak mudah tersapu oleh air.
Saat memperbaiki, itu harus dikeringkan perlahan. Jika memang ingin mempercepat, Anda bisa mengeringkannya beberapa kali dengan jarak di atas nyala lampu alkohol. Jangan biarkan slide kaca memanas, karena dapat menghancurkan bentuk kehidupan bakteri.
Pewarnaan gram dan pengamatan mikroskopis bakteri
1. Prinsip eksperimental
Prinsip pewarnaan Gram: Bakteri merespons pewarnaan Gram secara berbeda karena komposisi dan struktur dinding selnya. Dinding sel bakteri Gram-positif terutama merupakan simpul jaringan yang dibentuk oleh peptidoglikan. Ketika diberi perlakuan dengan etanol, ukuran pori struktur jaringan menjadi lebih kecil karena dehidrasi, dan permeabilitasnya menurun, sehingga kompleks kristal violet-iodine Substansi tersebut tidak mudah terelusi dan tertahan di dalam sel, dan warna biru- warna ungu dari zat pewarna utama masih dipertahankan setelah penghilangan warna dan pewarnaan ulang. Lapisan peptidoglikan dinding sel bakteri Gram negatif tipis dan kandungan lipidnya tinggi, sehingga ketika perlakuan dekolorisasi dilakukan, lipid dilarutkan oleh etanol (atau aseton), dan permeabilitas dinding sel meningkat, sehingga bahwa kompleks kristal violet-iodine Lebih mudah untuk dielusi, dan setelah pewarnaan ulang dengan pewarnaan ulang, sel-sel diwarnai dengan warna merah dari pewarnaan pengganti. Prinsip pencitraan mikroskop: Mikroskop optik biasa modern menggunakan dua sistem lensa lensa mata dan lensa objektif untuk memperbesar gambar, sehingga sering disebut mikroskop majemuk. Dalam sistem optik mikroskop, kinerja lensa objektif adalah yang paling kritis, dan pembesaran lensa minyak adalah yang terbesar, yang paling penting untuk penelitian mikrobiologi. Tujuan utama menambahkan minyak imersi antara slide kaca dan lensa adalah untuk meningkatkan kecerahan iluminasi dan meningkatkan resolusi mikroskop. Oli digunakan sebagai pengganti udara sebagai media transmisi cahaya untuk mengurangi refraksi atau pantulan total cahaya dan membuat gambar yang diamati lebih jelas.
2. Peralatan percobaan
1. Koloni:
Escherichia coli kultur agar miring 24 jam nutrien,
Staphylococcus aureus sekitar 24 jam kultur miring agar nutrisi, Bacillus subtilis 12-18jam kultur miring agar nutrisi.
2. Larutan atau reagen:
Air suling, larutan yodium, larutan pewarna kristal violet, alkohol 95 persen, larutan pewarna safranin, minyak cedar. 3. Instrumen:
Mikroskop, slide kaca, loop inokulasi, lampu alkohol, pinset, jaringan lensa.
3. Langkah-langkah percobaan
a:
1. Noda
Keluarkan slide, nyalakan slide, bakar alkohol pada slide dan sterilkan, taruh setetes air suling di tengahnya, gunakan loop inokulasi untuk mengambil sedikit bakteri dengan lembut pada media miring dari tes tabung, Selama seluruh proses, mulut tabung reaksi harus berada di atas lampu alkohol, dan kecepatannya harus cepat untuk mencegah kontaminasi media kultur. Kemudian oleskan tetesan air kecil pada slide kaca dengan gerakan memutar, hentikan saat tetesan air keruh, dan tunggu hingga mengering dan diperbaiki.
2. Pencelupan primer
Teteskan kristal violet (sebaiknya hanya menutupi lapisan bakteri) pada koloni, warnai selama 1-2 menit, tuangkan larutan pewarna, dan bilas dengan air halus dari bagian atas slide sampai eluat tidak berwarna, dan tempatkan noda pada slide. Kibaskan air pada irisan.
3. Mordan
Tambahkan larutan yodium tetes demi tetes untuk menghilangkan sisa air, tutup selama sekitar 1 menit, dan cuci dengan air.
4. Dekolorisasi
Kibaskan air pada slide kaca, miringkan slide kaca, dan tambahkan alkohol 95 persen untuk menghilangkan warna di bawah latar belakang putih, sampai alkohol yang keluar tidak tampak biru, segera bilas alkohol dengan air, dan tempatkan slide kaca Kocok dari air pada irisan.
5. Kontrastain
Counterstain dengan larutan safranin selama sekitar 1-2 menit, cuci dengan air, lalu keringkan dengan kertas penyerap
6. Pemeriksaan mikroskopis:
Cari koloni bakteri yang akan diamati di bawah lensa pembesaran rendah (geser slide terus, bila terasa ada bayangan merah segera hentikan, sesuaikan pembesaran, bila bukan koloni, terus cari), naikkan laras lensa, dan kemudian beralih ke cermin oli. Tambahkan setetes minyak cedar ke area sampel, dan turunkan laras lensa dengan hati-hati dengan pengatur kasar sehingga lensa oli terendam dalam oli dan hampir menyentuh spesimen. Naikkan kondensor ke posisi tertinggi dan buka apertur sepenuhnya, gunakan pengatur kasar untuk menaikkan laras lensa secara perlahan hingga gambar objek muncul di bidang pandang dan gunakan pengatur halus untuk memperjelas dan fokus.
