Apa itu Mikroskopi Fluoresensi Dua-Foton
Prinsip dasar eksitasi dua foton adalah: dalam kasus kerapatan foton tinggi, molekul fluoresen dapat menyerap dua foton dengan panjang gelombang panjang pada saat yang sama, dan memancarkan foton dengan panjang gelombang lebih pendek setelah periode singkat yang disebut masa hidup keadaan tereksitasi. . ; efeknya sama dengan menggunakan foton yang panjang gelombangnya setengah dari panjang gelombang panjang untuk membangkitkan molekul fluoresen. Eksitasi dua foton membutuhkan kerapatan foton yang tinggi. Agar tidak merusak sel, mikroskop dua-foton menggunakan laser berdenyut mode-energi tinggi. Laser yang dipancarkan laser ini memiliki energi puncak yang tinggi dan energi rata-rata yang rendah, lebar pulsanya hanya 100 femtosekon, dan frekuensinya bisa mencapai 80 hingga 100 megahertz. Saat menggunakan lensa objektif apertur numerik tinggi untuk memfokuskan foton laser berdenyut, kerapatan foton pada titik fokus lensa objektif adalah yang tertinggi, dan eksitasi dua foton hanya terjadi pada titik fokus lensa objektif, jadi mikroskop dua-foton tidak memerlukan lubang jarum confocal, yang meningkatkan efisiensi deteksi Fluoresensi.
Dalam fenomena fluoresensi umum, karena kerapatan foton cahaya eksitasi yang rendah, molekul fluoresensi hanya dapat menyerap satu foton pada saat yang sama, dan kemudian memancarkan foton fluoresen melalui transisi radiasi, yang merupakan fluoresensi foton tunggal. Untuk proses eksitasi fluoresensi menggunakan laser sebagai sumber cahaya, fluoresensi dua-foton atau bahkan multi-foton dapat terjadi. Saat ini, intensitas sumber cahaya eksitasi yang digunakan tinggi, dan kerapatan foton memenuhi persyaratan molekul fluoresen yang menyerap dua foton pada saat yang bersamaan. Dalam proses menggunakan laser umum sebagai sumber cahaya eksitasi, kerapatan foton masih belum cukup untuk menghasilkan fenomena penyerapan dua foton. Biasanya, laser berdenyut femtosecond digunakan, dan daya seketikanya dapat mencapai urutan megawatt. Oleh karena itu, panjang gelombang fluoresensi dua foton lebih pendek dari panjang gelombang cahaya eksitasi, yang setara dengan efek yang dihasilkan oleh eksitasi pada setengah panjang gelombang eksitasi.
