Apa perbedaan antara fluoresensi dan mikroskop confocal laser?
mikroskop fluoresensi
1. Mikroskop fluoresensi adalah suatu alat yang menggunakan sinar ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk menerangi benda yang diuji sehingga mengeluarkan fluoresensi, kemudian mengamati bentuk dan kedudukan benda di bawah mikroskop. Mikroskop fluoresensi digunakan untuk mempelajari penyerapan, transportasi, distribusi, dan lokalisasi zat di dalam sel. Beberapa zat di dalam sel, seperti klorofil, dapat memancarkan fluoresensi setelah terkena radiasi ultraviolet; Beberapa zat sendiri mungkin tidak memancarkan fluoresensi, tetapi jika diwarnai dengan pewarna fluoresen atau antibodi fluoresen, zat tersebut juga dapat memancarkan fluoresensi di bawah radiasi ultraviolet. Mikroskop fluoresensi merupakan salah satu alat untuk penelitian kualitatif dan kuantitatif terhadap zat-zat tersebut.
2. Prinsip mikroskop fluoresensi:
(A) Sumber cahaya: Sumber cahaya memancarkan cahaya dengan berbagai panjang gelombang (dari ultraviolet hingga inframerah).
(B) Sumber cahaya filter eksitasi: Mengirimkan cahaya dengan panjang gelombang tertentu yang dapat menghasilkan fluoresensi pada spesimen, sekaligus menghalangi cahaya yang tidak berguna untuk fluoresensi eksitasi.
(C) Spesimen berpendar: umumnya diwarnai dengan pigmen berpendar.
(D) Filter pemblokiran: mentransmisikan fluoresensi secara selektif dengan memblokir cahaya eksitasi yang belum diserap oleh spesimen, dan beberapa panjang gelombang juga ditransmisikan secara selektif dalam fluoresensi. Mikroskop yang menggunakan sinar ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk memancarkan fluoresensi dari benda yang disinari. Mikroskop elektron pertama kali dirakit oleh Knorr dan Harroska di Berlin, Jerman pada tahun 1931. Mikroskop jenis ini menggunakan berkas elektron berkecepatan tinggi sebagai pengganti berkas cahaya. Karena panjang gelombang aliran elektron yang jauh lebih pendek dibandingkan gelombang cahaya, maka perbesaran mikroskop elektron dapat mencapai 800000 kali, dengan batas resolusi minimal 0,2 nanometer. Mikroskop elektron pemindai, yang mulai digunakan pada tahun 1963, memungkinkan orang melihat struktur kecil di permukaan benda.
3. Ruang lingkup aplikasi: Digunakan untuk memperbesar gambar benda kecil. Umumnya digunakan untuk pengamatan biologi, kedokteran, partikel mikroskopis, dll.
mikroskop konfokal
1. Mikroskop confocal menambahkan lensa semi reflektif ke jalur cahaya yang dipantulkan, yang membelokkan cahaya pantulan yang telah melewati lensa ke arah lain. Terdapat penyekat dengan lubang jarum di titik fokusnya, dan lubang kecil terletak di titik fokus. Di belakang penyekat terdapat tabung pengganda foto. Dapat dibayangkan bahwa cahaya yang dipantulkan sebelum dan sesudah titik fokus cahaya pendeteksi tidak dapat difokuskan pada lubang kecil melalui sistem confocal ini dan akan terhalang oleh penyekat. Jadi fotometer mengukur intensitas cahaya yang dipantulkan pada titik fokus.
2. Prinsip: Mikroskop optik tradisional menggunakan sumber cahaya lapangan, dan gambar setiap titik pada spesimen akan dipengaruhi oleh difraksi atau hamburan cahaya dari titik-titik tetangga; Mikroskop confocal pemindaian laser menggunakan sinar laser untuk membentuk sumber cahaya titik melalui lubang jarum yang menyala untuk memindai setiap titik pada bidang fokus spesimen. Titik terang pada spesimen dicitrakan pada lubang jarum deteksi, dan diterima titik demi titik atau garis oleh tabung fotomultiplier (PMT) atau perangkat kopling termoelektrik (cCCD) setelah lubang jarum deteksi, dengan cepat membentuk gambar fluoresen pada monitor komputer layar. Lubang jarum iluminasi dan lubang jarum deteksi terkonjugasi relatif terhadap bidang fokus lensa objektif. Titik-titik pada bidang fokus secara bersamaan difokuskan pada lubang jarum iluminasi dan lubang jarum emisi, dan titik-titik di luar bidang fokus tidak akan dicitrakan pada lubang jarum pendeteksi. Hal ini menghasilkan gambar confocal yang mewakili penampang optik spesimen, mengatasi kelemahan gambar kabur dalam mikroskop konvensional.
3. Bidang aplikasi: melibatkan kedokteran, penelitian hewan dan tumbuhan, biokimia, bakteriologi, biologi sel, jaringan dan embrio, ilmu pangan, genetika, farmakologi, fisiologi, optik, patologi, botani, ilmu saraf, biologi kelautan, ilmu material, ilmu elektronik, mekanika, geologi perminyakan, dan mineralogi.
