Menggunakan Mikroskopi Fluoresensi: Teknik dan Keterampilan
Parameter Teknis Mikroskop Fluoresensi 1. Lensa okuler sudut lebar 2. Lensa objektif akromatik 3. Konverter lensa objektif empat lubang 4. Perangkat epi-fluorescent Sistem eksitasi Biru (B) Hijau (G) 10Lampu merkuri 0W 5. Mekanisme penyesuaian fokus kasar dan halus koaksial: penyesuaian Rentang fokus: 15mm Nilai kisi gerakan mikro: 0,002mm 6. Meja mekanis dua lapis Rentang gerakan longitudinal: 70mm Rentang gerakan lateral: 50mm
Gunakan metode keterampilan
(1) Slide kaca
Ketebalan slide kaca harus antara 0.8 dan 1,2 mm. Slide yang terlalu tebal akan menyerap lebih banyak cahaya di satu sisi, dan di sisi lain cahaya eksitasi tidak dapat terkonsentrasi pada spesimen. Slide harus halus, seragam dalam ketebalan, dan bebas dari autofluoresensi yang jelas. Terkadang slide kaca kuarsa digunakan.
(2) Kaca penutup
Ketebalan kaca penutup sekitar 0.17mm, mulus. Untuk memperkuat cahaya eksitasi, kaca penutup interferensi juga dapat digunakan, yaitu kaca penutup khusus yang dilapisi dengan beberapa lapisan zat (seperti magnesium fluorida) yang memiliki efek interferensi berbeda pada cahaya dengan panjang gelombang berbeda, yang dapat membuat fluoresensi berjalan lancar. Cahaya yang menggairahkan dilewatkan dan dipantulkan, dan cahaya eksitasi yang dipantulkan ini menggairahkan spesimen.
(3) Spesimen
Irisan jaringan atau spesimen lainnya tidak boleh terlalu tebal. Jika terlalu tebal, sebagian besar cahaya eksitasi akan dikonsumsi di bagian bawah spesimen, sedangkan bagian atas yang diamati langsung oleh lensa objektif tidak akan tereksitasi sepenuhnya. Selain itu, tumpang tindih sel atau penutup pengotor, memengaruhi penilaian.
(4) Agen pemasangan
Gliserin umumnya digunakan sebagai agen pemasangan, yang tidak boleh memiliki autofluoresensi, tidak berwarna dan transparan, dan kecerahan fluoresensi lebih cerah pada pH 8.5-9.5, dan tidak mudah memudar dengan cepat. Oleh karena itu, campuran yang sama antara larutan buffer gliserol dan 0.5mol/l karbonat dengan pH 9.0 hingga 9,5 biasanya digunakan sebagai zat pengikat.
(5) minyak cermin
Umumnya, ketika mengamati spesimen dengan mikroskop fluoresensi medan gelap dan lensa imersi minyak, minyak imersi harus digunakan. Yang terbaik adalah menggunakan minyak imersi non-fluorescent khusus. Gliserin di atas juga dapat digunakan sebagai gantinya, dan parafin cair juga dapat digunakan, tetapi indeks biasnya rendah, yang berdampak kecil pada kualitas gambar. Pengaruh.
