Prinsip-prinsip mikroskop fluoresensi dan mikroskop confocal laser
mikroskop fluoresensi
1. Mikroskop fluoresensi adalah suatu alat yang menggunakan sinar ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk menerangi benda yang diuji sehingga mengeluarkan fluoresensi, kemudian mengamati bentuk dan letak benda di bawah mikroskop. Mikroskop fluoresensi digunakan untuk mempelajari penyerapan, transportasi, distribusi, dan lokalisasi zat intraseluler. Beberapa zat di dalam sel, seperti klorofil, dapat memancarkan fluoresensi setelah terkena radiasi ultraviolet; Meskipun beberapa zat sendiri tidak dapat memancarkan fluoresensi, zat tersebut juga dapat memancarkan fluoresensi setelah diwarnai dengan pewarna fluoresen atau antibodi fluoresen dan disinari dengan sinar ultraviolet. Mikroskop fluoresensi merupakan salah satu alat untuk penelitian kualitatif dan kuantitatif terhadap zat-zat tersebut.
2. Prinsip mikroskop fluoresensi:
(A) Sumber cahaya: Sumber cahaya memancarkan cahaya dengan berbagai panjang gelombang (dari ultraviolet hingga inframerah).
(B) Sumber cahaya filter eksitasi: Mengirimkan cahaya dengan panjang gelombang tertentu yang dapat menghasilkan fluoresensi pada spesimen, sekaligus menghalangi cahaya yang tidak berguna untuk fluoresensi eksitasi.
(C) Spesimen berpendar: Umumnya diwarnai dengan pigmen berpendar.
(D) Filter pemblokiran: mentransmisikan fluoresensi secara selektif dengan memblokir eksitasi yang belum diserap oleh spesimen, dan beberapa panjang gelombang juga ditransmisikan secara selektif dalam fluoresensi. Mikroskop yang menggunakan sinar ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk memancarkan fluoresensi dari benda yang disinari. Mikroskop elektron pertama kali dirakit oleh Knorr dan Harroska di Berlin, Jerman pada tahun 1931. Mikroskop jenis ini menggunakan berkas elektron berkecepatan tinggi, bukan berkas cahaya. Karena panjang gelombang aliran elektron yang jauh lebih pendek dibandingkan gelombang cahaya, maka perbesaran mikroskop elektron dapat mencapai 800000 kali, dengan batas resolusi minimal 0,2 nanometer. Mikroskop elektron pemindai, yang mulai digunakan pada tahun 1963, memungkinkan orang melihat struktur kecil di permukaan benda.
3. Ruang lingkup aplikasi: Digunakan untuk memperbesar gambar benda kecil. Umumnya digunakan untuk observasi biologi, kedokteran, partikel mikroskopis, dll.
mikroskop konfokal
1. Mikroskop confocal menambahkan lensa semi reflektif ke jalur cahaya yang dipantulkan, yang membelokkan cahaya pantulan yang telah melewati lensa ke arah lain. Terdapat penyekat dengan lubang jarum di titik fokusnya, dan lubang kecil terletak di titik fokus. Di belakang penyekat terdapat tabung pengganda foto. Dapat dibayangkan bahwa cahaya yang dipantulkan sebelum dan sesudah titik fokus cahaya pendeteksi tidak dapat difokuskan pada lubang kecil melalui sistem confocal ini, dan akan terhalang oleh penyekat. Jadi yang diukur oleh fotometer adalah intensitas cahaya yang dipantulkan pada titik fokus.
2. Prinsip: Mikroskop optik tradisional menggunakan sumber cahaya lapangan, dan gambar setiap titik pada spesimen dipengaruhi oleh difraksi atau cahaya yang tersebar dari titik-titik yang berdekatan; Mikroskop confocal pemindaian laser menggunakan sumber cahaya titik yang dibentuk oleh sinar laser yang melewati lubang jarum yang menyala untuk memindai setiap titik pada bidang fokus spesimen. Titik yang menyala pada spesimen dicitrakan pada lubang jarum probe, dan diterima titik demi titik atau garis oleh tabung photomultiplier (PMT) atau perangkat kopling termoelektrik (cCCD) setelah lubang jarum probe, dengan cepat membentuk gambar fluoresen pada layar monitor komputer . Lubang jarum iluminasi dan lubang jarum deteksi terkonjugasi relatif terhadap bidang fokus lensa objektif. Titik-titik pada bidang fokus secara bersamaan difokuskan pada lubang jarum iluminasi dan lubang jarum emisi, dan titik-titik di luar bidang fokus tidak dicitrakan pada lubang jarum pendeteksi. Hal ini menghasilkan gambar confocal yang merupakan penampang optik spesimen, mengatasi kelemahan keburaman pada gambar mikroskop umum.
3. Bidang aplikasi: melibatkan kedokteran, penelitian hewan dan tumbuhan, biokimia, bakteriologi, biologi sel, embriologi jaringan, ilmu pangan, genetika, farmakologi, fisiologi, optik, patologi, botani, ilmu saraf, biologi kelautan, ilmu material, ilmu elektronik, mekanika , geologi perminyakan, dan mineralogi.
