Keterampilan dan metode menggunakan mikroskop fluoresensi
Parameter teknis mikroskop fluoresensi 1. Lensa mata sudut lebar 2. Objektif akromatik 3. Konverter objektif empat lubang 4. Perangkat pemancar fluoresensi sistem eksitasi biru (b) hijau (g) 100W lampu merkuri 5. Koaksial kasar mekanisme pemfokusan mikro: rentang pemfokusan 15 mm, nilai jaringan mikro 0,002 mm 6. Rentang pergerakan memanjang meja kerja mekanis dua lapis: 70 mm, rentang pergerakan lateral: 50 mm.
Keterampilan dan metode menggunakan mikroskop fluoresensi
(1) slide kaca
Ketebalan slide harus antara 0.8-1.2 mm dan 1,2 mm. Kaca objek yang terlalu tebal tidak akan menyerap banyak cahaya di satu sisi, dan tidak akan membuat cahaya eksitasi berkumpul pada spesimen di sisi lain. Kaca objek harus halus, ketebalannya seragam dan bebas dari fluoresensi spontan yang terlihat jelas. Slide kaca Shi Ying terkadang diperlukan.
(2) Kaca penutup
Kaca penutupnya tebal dan halus sekitar 0.17mm. Untuk meningkatkan cahaya eksitasi, dapat juga digunakan kaca penutup interferensi, yaitu sejenis kaca penutup khusus dengan beberapa lapisan zat (seperti magnesium fluorida) yang memiliki efek interferensi berbeda pada panjang gelombang cahaya berbeda. Hal ini dapat membuat fluoresensi lewat dengan lancar dan memantulkan cahaya eksitasi, dan cahaya eksitasi yang dipantulkan ini dapat menggairahkan spesimen.
(3) Spesimen
Bagian jaringan atau spesimen lainnya tidak boleh terlalu tebal. Jika terlalu tebal, sebagian besar cahaya eksitasi dikonsumsi di bagian bawah spesimen, sedangkan bagian atas yang diamati langsung oleh lensa objektif tidak tereksitasi sepenuhnya. Selain itu, tumpang tindih sel atau penyembunyian pengotor mempengaruhi penilaian.
(4) agen penyegel
Gliserol biasanya digunakan sebagai bahan penyegel, yang harus tidak berwarna dan transparan tanpa fluoresensi spontan. Kecerahan fluoresensi cerah pada pH 8,5 ~ 9,5, dan tidak mudah pudar dengan cepat. Oleh karena itu, campuran setara gliserol dan 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 buffer karbonat sering digunakan sebagai bahan penyegel.
(5) minyak cermin
Umumnya, minyak cermin harus digunakan saat mengamati sampel dengan mikroskop fluoresensi medan gelap dan cermin minyak. Yang terbaik adalah menggunakan minyak cermin non-fluoresen khusus, atau Anda dapat menggunakan gliserin di atas. Parafin cair juga dapat digunakan, namun indeks biasnya rendah, sehingga berdampak kecil pada kualitas gambar.
