Beberapa mikroskop optik khusus dan perbedaannya
1 mikroskop lapangan gelap
Mikroskop medan gelap tidak memiliki fungsi mengamati struktur halus di dalam objek, tetapi dapat membedakan keberadaan dan pergerakan partikel di atas 0.004 μm. Oleh karena itu, sering digunakan untuk mengamati struktur sel hidup dan pergerakan partikel intraseluler.
Prinsip dasar mikroskop medan gelap adalah efek Tyndall. Ketika seberkas cahaya melewati ruangan gelap, "jalur" debu terang di udara dapat diamati dari arah tegak lurus terhadap cahaya datang. Fenomena ini adalah efek Tyndall.
Setelah mikroskop medan gelap diganti dengan kondensor medan gelap pada mikroskop optik biasa, karena oklusi struktur parabola internal kondensor, cahaya yang dipancarkan pada permukaan objek yang akan diperiksa tidak dapat langsung masuk ke lensa objektif dan lensa mata, dan hanya cahaya yang tersebar yang dapat melewatinya, sehingga bidang pandang menjadi gelap.
Penggunaan dasar mikroskop medan gelap adalah sebagai berikut:
1. Pasang kondensor medan gelap (atau gunakan kertas hitam tebal untuk membuat pelindung cahaya dan letakkan di bawah kondensor mikroskop biasa untuk mendapatkan efek medan gelap).
2. Pilih sumber cahaya yang kuat, biasanya dengan cahaya mikroskop untuk mencegah cahaya langsung masuk ke lensa objektif.
3. Tambahkan setetes minyak cedar di antara kondensor dan kaca objek untuk menghindari pantulan total dari cahaya yang menyinari kondensor, gagal mencapai objek yang akan diperiksa dan iluminasi medan gelap.
4. Lakukan penyetelan tengah, yaitu gerakkan kondensor secara horizontal sehingga sumbu optik kondensor dan sumbu optik mikroskop benar-benar pada garis lurus. Angkat dan turunkan kondensor, sejajarkan titik fokus kondensor (puncak balok kerucut pada Gambar 1-2) dengan objek yang akan diuji.
5. Pilih lensa objektif yang sesuai dengan kondensor, sesuaikan panjang fokus, dan operasikan sesuai dengan metode mikroskop biasa.
Mikroskop stereo
Mikroskop stereo, juga dikenal sebagai mikroskop padat atau cermin bedah, menggambarkan gambar ruang tiga dimensi tegak, dan memiliki karakteristik efek stereoskopis yang kuat, pencitraan yang jelas dan lebar, jarak kerja yang panjang (biasanya 110mm) dan tampilan pembesaran terus menerus. Sering digunakan dalam biologi untuk observasi real-time selama pembedahan
Sumber cahaya mikroskop optik biasa adalah cahaya paralel, sehingga membentuk gambar bidang dua dimensi; sementara mikroskop stereo mengadopsi jalur optik saluran ganda, dan balok kiri dan kanan dalam tabung teropong memiliki sudut pandang tertentu (umumnya 12o15o), sehingga dapat terbentuk gambar stereoskopik dalam ruang tiga dimensi.
Mikroskop stereo digunakan dengan cara yang mirip dengan mikroskop cahaya biasa, tetapi lebih nyaman. Perbedaan utama antara keduanya adalah:
1. Objek pemeriksaan mikroskop stereo tidak perlu dibuat slide.
2. Panggung mikroskop stereo dipasang langsung pada alas cermin, dan dilengkapi dengan panel dua sisi hitam putih atau panel kaca, dan operator dapat memilih sesuai dengan objek dan persyaratan pemeriksaan mikroskop.
3. Pencitraan mikroskop stereo tegak, yang nyaman untuk operasi pembedahan.
4. Mikroskop stereo hanya memiliki satu lensa objektif, dan perbesarannya dapat terus disesuaikan dengan memutar sekrup pengatur.
mikroskop fluoresensi
Mikroskopi fluoresensi adalah alat optik untuk penelitian kualitatif dan kuantitatif pada intensitas fluoresensi yang dipancarkan oleh zat intraseluler.
Ada dua jenis zat fluoresen di dalam sel, yang satu dapat berfluoresensi langsung setelah disinari sinar ultraviolet, seperti klorofil, dll.; zat lain tidak memiliki sifat ini, tetapi jika diwarnai dengan pewarna fluoresen tertentu atau antibodi fluoresen, zat tersebut dapat difluoresensi oleh sinar ultraviolet. Bisa juga berpendar setelah iradiasi
Mikroskop Bioluminesensi Tegak / Mikroskop Bioluminesensi Terbalik
Prinsip mikroskop fluoresensi adalah menggunakan sumber cahaya titik dengan efisiensi bercahaya tinggi (seperti lampu merkuri bertekanan sangat tinggi) untuk memancarkan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (seperti sinar ultraviolet 3650λ atau cahaya ungu-biru 4200λ) melalui sistem filter sebagai cahaya eksitasi untuk mengeksitasi zat fluoresen dalam spesimen. Setelah fluoresensi berbagai warna dipancarkan, itu disaring oleh filter pemblokiran (atau penekan) di belakang lensa objektif, dan kemudian diamati melalui pembesaran lensa mata.
Filter pemblokiran memiliki dua fungsi: satu untuk menyerap dan menghalangi cahaya eksitasi memasuki lensa mata agar tidak mengganggu fluoresensi dan merusak mata; yang lainnya adalah memilih dan membiarkan fluoresensi tertentu melewatinya, menunjukkan warna fluoresen tertentu.
Mikroskop fluoresensi dapat dibagi menjadi dua jenis sesuai dengan prinsip jalur optik:
1. Mikroskop Fluoresensi Transmisi
Dalam mikroskop fluoresensi yang lebih tua, sumber cahaya eksitasi dilewatkan melalui bahan spesimen melalui kondensor untuk membangkitkan fluoresensi. Keuntungannya adalah fluoresensi kuat pada perbesaran rendah, tetapi kerugiannya adalah fluoresensi berkurang dengan peningkatan pembesaran. Jadi hanya cocok untuk mengamati bahan spesimen yang lebih besar.
2. Mikroskop Epifluoresensi
Cahaya eksitasi jatuh dari lensa objektif ke permukaan spesimen, yaitu lensa objektif yang sama digunakan sebagai kondensor iluminasi dan lensa objektif untuk mengumpulkan fluoresensi.
Dichroic beam splitter (cermin dichroic) perlu ditambahkan pada jalur optik yang membentuk sudut 45o dengan sumbu optik. Cahaya eksitasi dipantulkan ke lensa objektif dan dikumpulkan pada sampel. Cahaya eksitasi yang dipantulkan oleh permukaan slide memasuki lensa objektif pada saat yang sama, kembali ke pembagi berkas dua warna, memisahkan cahaya eksitasi dari fluoresensi, dan cahaya eksitasi yang tersisa diserap oleh filter pemblokiran. Jika Anda mengubah ke kombinasi filter eksitasi yang berbeda/pembagi sinar dua warna/filter pemblokiran, kebutuhan produk reaksi fluoresen yang berbeda dapat dipenuhi.
Keuntungan dari jenis mikroskop fluoresensi ini adalah iluminasi bidang pandangnya seragam, pencitraannya jelas, dan semakin besar perbesarannya, semakin kuat fluoresensinya.
mikroskop fase kontras
Mikroskop kontras fase adalah mikroskop yang dapat mengubah perbedaan fase (atau perbedaan jalur optik) yang dihasilkan ketika cahaya melewati suatu objek menjadi perubahan amplitudo (intensitas cahaya). Ini terutama digunakan untuk mengamati sel-sel hidup, bagian jaringan yang tidak ternoda atau spesimen bernoda yang kurang kontras.
Mata manusia hanya dapat mengidentifikasi perubahan panjang gelombang (warna) dan amplitudo cahaya tampak, tetapi bukan perubahan fase. Namun, sebagian besar spesimen biologis sangat transparan, dan amplitudo gelombang cahaya pada dasarnya tidak berubah setelah melewatinya, dan hanya fase yang berubah.
Mikroskop kontras fase pada dasarnya mengubah perbedaan jalur optik dari cahaya tampak yang melewati spesimen menjadi perbedaan amplitudo, sehingga meningkatkan kontras antara berbagai struktur dan membuat berbagai struktur terlihat jelas. Cahaya dibiaskan setelah melewati spesimen, menyimpang dari jalur optik asli, dan tertunda 1/4λ (panjang gelombang) pada saat yang bersamaan. Jika dinaikkan atau diturunkan 1/4λ, perbedaan jalur optik menjadi 1/2λ, dan kedua berkas berinterferensi setelah sumbu optik Memperkuat, menambah atau mengurangi amplitudo, meningkatkan kontras.
Secara struktural, mikroskop kontras fase berbeda dari mikroskop optik biasa dalam hal:
1. Diafragma annular memiliki diafragma dengan bukaan cincin, yang dipasang di antara sumber cahaya dan kondensor. Fungsinya agar cahaya yang melewati kondensor membentuk kerucut cahaya berongga dan fokus pada spesimen.
2. Pelat fase Mikroskop kontras fase menambahkan pelat fase yang dilapisi dengan magnesium fluorida di dalam lensa objektif untuk menunda fase cahaya langsung atau cahaya yang dibiaskan sebesar 1/4λ. Ada dua daerah pada pelat fase, bagian yang dilalui cahaya langsung disebut "permukaan konjugasi", dan bagian yang dilalui cahaya yang difraksi disebut "permukaan kompensasi". Pelat fase dibagi menjadi dua jenis sesuai dengan efek kerjanya:
(1) Pelat fase plus: cahaya langsung tertunda 1/4λ, dan gelombang cahaya ditumpangkan setelah dua set gelombang cahaya bergabung untuk meningkatkan amplitudo, dan struktur spesimen lebih terang dari media sekitarnya, membentuk a kontras terang (atau kontras negatif).
(2) Pelat fase plus B: Cahaya yang dibiaskan tertunda 1/4λ, dan gelombang cahaya dari dua kelompok cahaya dikurangi setelah sumbu disejajarkan, dan amplitudo menjadi lebih kecil. Struktur spesimen lebih gelap dari medium sekitarnya, membentuk kontras gelap (atau kontras positif). Lensa objektif dengan pelat fase disebut lensa objektif kontras fase, yang sering ditandai dengan "Ph" pada wadah lensa objektif.
