Persyaratan untuk produksi spesimen mikroskop fluoresen
（1） Kaca slide
Ketebalan slide harus antara 0,8 dan 1,2 mm. Jika slide terlalu tebal, di satu sisi akan menyerap lebih banyak cahaya, dan di sisi lain tidak dapat menyebabkan cahaya eksitasi berkumpul pada spesimen. Kaca objek harus halus, ketebalannya seragam, dan bebas dari fluoresensi spontan yang terlihat jelas. Terkadang diperlukan slide kaca kuarsa.
（2） Tutup kaca objek
Ketebalan kaca penutupnya sekitar 0.17mm, halus dan bersih. Untuk meningkatkan eksitasi, kaca penutup interferensi juga dapat digunakan. Ini adalah kaca penutup yang dirancang khusus dengan beberapa lapisan zat (seperti magnesium fluorida) yang memiliki efek interferensi berbeda pada panjang gelombang cahaya berbeda. Hal ini memungkinkan fluoresensi lewat dengan lancar, sedangkan eksitasi refleksi dapat menggairahkan spesimen.
（3） Spesimen
Irisan jaringan atau spesimen lain tidak boleh terlalu tebal, karena cahaya eksitasi sebagian besar dikonsumsi di bagian bawah spesimen, sedangkan bagian atas yang diamati langsung oleh lensa objektif tidak tereksitasi sepenuhnya. Selain itu, sel yang tumpang tindih atau penyembunyian pengotor dapat memengaruhi penilaian.
（4） Bahan penyegel
Gliserin biasanya digunakan sebagai bahan pengikat, dan harus bebas dari fluoresensi spontan, tidak berwarna dan transparan. Kecerahan fluoresensi lebih terang pada pH 8,5~9,5, dan tidak mudah memudar dengan cepat. Oleh karena itu, campuran gliserol dan 0.5mol/l buffer karbonat yang setara pada pH 9.0-9.5 biasanya digunakan sebagai bahan penyekat.
（5） Minyak cermin
Saat mengamati spesimen menggunakan mikroskop fluoresensi medan gelap dan mikroskop minyak, perlu menggunakan minyak lensa. Cara terbaik adalah menggunakan minyak lensa non-fluorescent yang dibuat khusus, yang juga dapat diganti dengan gliserol seperti disebutkan di atas. Parafin cair juga dapat digunakan, namun indeks biasnya rendah dan berdampak kecil pada kualitas gambar.
Tindakan pencegahan untuk menggunakan mikroskop fluoresensi
(1) Ikuti dengan ketat persyaratan manual pabrik mikroskop fluoresensi dan jangan mengubah program secara sembarangan.
(2) Pemeriksaan sebaiknya dilakukan di ruangan gelap. Setelah memasuki kamar gelap, sambungkan catu daya dan nyalakan lampu merkuri bertekanan sangat tinggi selama 5 hingga 15 menit. Setelah sumber cahaya memancarkan cahaya yang kuat dan stabil, mata beradaptasi sepenuhnya dengan kamar gelap sebelum mulai mengamati spesimen.
(3) Untuk mencegah kerusakan akibat sinar UV pada mata, kacamata pelindung harus dipakai saat mengatur sumber cahaya.
(4) Waktu pemeriksaan harus 1-2 jam setiap kali pemeriksaan. Jika melebihi 90 menit, intensitas cahaya lampu merkuri bertekanan sangat tinggi secara bertahap menurun dan fluoresensi melemah; Setelah terkena radiasi ultraviolet selama 3-5 menit, fluoresensi spesimen juga menurun secara signifikan; Jadi, durasinya tidak boleh lebih dari 2-3 jam.
(5) Masa pakai sumber cahaya mikroskop fluoresen terbatas, dan spesimen harus diperiksa secara terpusat untuk menghemat waktu dan melindungi sumber cahaya. Saat cuaca panas, kipas angin listrik harus ditambahkan untuk menghilangkan panas dan mendinginkan. Saat mengganti bola lampu baru, sebaiknya catat waktu pemakaiannya dari awal. Apabila lampu dimatikan dan ingin digunakan kembali, harus menunggu hingga bohlam benar-benar dingin sebelum dinyalakan. Hindari menyalakan sumber cahaya berkali-kali.
(6) Amati spesimen segera setelah pewarnaan, karena fluoresensi secara bertahap menurun seiring berjalannya waktu. Jika spesimen disimpan dalam kantong plastik polietilen pada suhu 4 derajat, hal ini dapat menunda waktu redaman fluoresensi dan mencegah penguapan bahan pemasangan.
(7) Standar penilaian kecerahan fluoresensi umumnya dibagi menjadi empat tingkatan, yaitu "satu" - tidak ada atau terlihat fluoresensi lemah. +- Hanya fluoresensi yang terlihat jelas yang dapat dilihat. ++- Terlihat dengan fluoresensi terang. '+++' - Fluoresensi terlihat dan mempesona.
