Persyaratan untuk persiapan slide mikroskop fluoresen
(1) Kaca geser
Ketebalan slide harus antara 0,8 dan 1,2 mm. Jika slide terlalu tebal, di satu sisi akan menyerap lebih banyak cahaya, dan di sisi lain, cahaya eksitasi tidak akan berkumpul pada spesimen. Kaca slide harus halus, ketebalannya seragam, dan tidak memiliki fluoresensi spontan yang jelas. Terkadang diperlukan slide kaca kuarsa.
(2) Tutup kaca objek
Ketebalan kaca penutupnya sekitar 0.17mm dan halus. Untuk meningkatkan cahaya eksitasi, kaca penutup interferensi juga dapat digunakan. Ini adalah kaca penutup yang dirancang khusus dengan beberapa lapisan zat (seperti magnesium fluorida) yang memiliki efek interferensi berbeda pada cahaya dengan panjang gelombang berbeda. Hal ini dapat memungkinkan fluoresensi lewat dengan lancar, sedangkan cahaya eksitasi pantulan dapat menggairahkan spesimen.
(3) Spesimen
Irisan tisu atau spesimen lainnya tidak boleh terlalu tebal. Jika terlalu tebal, sebagian besar cahaya eksitasi dikonsumsi di bagian bawah spesimen, sedangkan bagian atas yang diamati langsung oleh lensa objektif tidak tereksitasi sepenuhnya. Selain itu, sel yang tumpang tindih atau penyembunyian pengotor dapat memengaruhi penilaian.
(4) Agen penyegel
Gliserin umumnya digunakan sebagai bahan pengikat, yang tidak boleh berfluoresensi spontan, tidak berwarna dan transparan. Kecerahan fluoresensi relatif cerah pada pH 8.5-9.5 dan tidak mudah memudar dengan cepat. Oleh karena itu, campuran gliserol dan buffer karbonat 0.5mol/L yang setara dengan pH 9.0-9.5 biasanya digunakan sebagai bahan penyekat.
(5) Minyak cermin
Saat menggunakan mikroskop fluoresensi medan gelap dan mikroskop minyak untuk mengamati spesimen, minyak cermin harus digunakan. Minyak cermin non-fluorescent khusus dapat digunakan, atau gliserol dapat digunakan sebagai pengganti. Parafin cair juga dapat digunakan, namun indeks biasnya rendah dan berdampak kecil pada kualitas gambar.
