Persiapan dan observasi sampel biologis untuk mikroskop elektron
Resolusi mikroskop tergantung pada panjang gelombang cahaya yang digunakan. Mikroskop elektron, yang mulai muncul pada tahun 1933, menggunakan berkas elektron dengan panjang gelombang yang jauh lebih pendek daripada cahaya tampak sebagai sumber cahaya, sehingga resolusi yang dicapai jauh lebih baik dibandingkan dengan mikroskop optik. Perbedaan sumber cahaya juga menentukan serangkaian perbedaan antara mikroskop elektron dan mikroskop optik.
Berdasarkan perbedaan prinsip pencitraan berkas elektron dan perbedaan cara bertindak pada sampel, mikroskop elektron modern telah berkembang menjadi banyak jenis. Saat ini, yang paling umum digunakan adalah mikroskop elektron transmisi dan mikroskop elektron pemindaian. Perbesaran total yang pertama bisa antara 1000-1000000. Perbesaran total yang terakhir dapat bervariasi antara 20 dan 300,000 kali. Eksperimen ini terutama memperkenalkan persiapan dua jenis sampel mikroskop, mikroskop elektron transmisi dan mikroskop elektron pemindaian.
2. Peralatan
1. Bakteri Escherichia coli (Escherichia coli) miring.
2. Larutan atau reagen amil asetat, asam sulfat pekat, etanol absolut, air steril, 2% natrium fosfotungstat (pH 6.5-8.0) larutan berair, 0.3% polietilen larutan formaldehida (larut dalam kloroform), pigmen sel c, amonium asetat, plasmid pBR322.
3. Instrumen atau peralatan lainnya: mikroskop optik biasa, jaring tembaga, corong porselen, gelas kimia, piring, penetes steril, pinset steril, peniti, slide, papan hitung, mesin pelapis vakum, pengering titik kritis, dll.
3. Langkah-langkah pengoperasian
(1) Persiapan sampel dan pengamatan untuk mikroskop elektron transmisi
1. Perawatan jaring logam
Sampel untuk mikroskop optik ditempatkan pada kaca objek untuk diamati. Namun pada mikroskop elektron transmisi, karena elektron tidak dapat menembus lembaran kaca, bahan jaring hanya dapat digunakan sebagai pembawa, biasa disebut jaring pembawa. Jaring pembawa dapat dibagi menjadi banyak spesifikasi berbeda karena bahan dan bentuk yang berbeda, di antaranya yang paling umum digunakan adalah jaring tembaga 200-400 (jumlah lubang). Jaring tembaga harus dirawat sebelum digunakan untuk menghilangkan kotoran dan menjaganya tetap bersih, jika tidak maka akan mempengaruhi kualitas film pendukung dan kejernihan foto spesimen. Percobaan ini menggunakan jaring tembaga 400-mesh, yang dapat diperlakukan sebagai berikut: pertama, rendam dan pemutih dengan amil asetat selama beberapa jam, kemudian bilas dengan air suling beberapa kali, lalu rendam dalam etanol absolut selama dehidrasi. Jika jaring tembaga masih belum bersih setelah cara di atas, Anda dapat merendamnya dalam asam sulfat pekat encer (1:1) selama 1 hingga 2 menit, atau merebusnya dalam larutan NaOH 1% selama beberapa menit, bilas dengan air suling. air beberapa kali, lalu masukkan ke dalam Dehidrasi anhidrat dalam etanol dan sisihkan.
2. Persiapan membran pendukung
Saat mengamati sampel, jaring pembawa juga harus ditutup dengan lapisan film seragam yang tidak terstruktur, jika tidak, sampel kecil akan bocor keluar dari lubang jaring pembawa. Film ini biasa disebut dengan film pendukung atau film pembawa. Film pendukung harus transparan elektron, dan ketebalannya umumnya kurang dari 20nm; di bawah pengaruh berkas elektron, film juga harus memiliki kekuatan mekanik tertentu untuk menjaga stabilitas struktural dan memiliki konduktivitas termal yang baik; selain itu, jaringan pendukung harus digunakan dalam mikroskop elektron. Tidak boleh ada struktur yang terlihat di bawahnya, tidak ada reaksi kimia dengan sampel yang dibawa, dan tidak ada gangguan pada pengamatan sampel. Ketebalannya umumnya sekitar 15nm. Film pendukung dapat berupa film plastik (seperti film collodion, film polietilen formaldehida, dll.), film karbon atau film logam (seperti film berilium, dll.). Dalam kondisi kerja normal, film plastik dapat memenuhi persyaratan. Di antara film plastik, film collodion relatif mudah dibuat, namun kekuatannya tidak sebaik film polietilen formaldehida.
