PH meter - Penentuan dan penyesuaian pH media
Semua mikroorganisme dipengaruhi oleh pH lingkungan tempat mereka hidup. Seringkali, keberadaan spesies selektif mempersempit kisaran pH tempat mereka tumbuh. Kadang-kadang, keasaman atau kebasaan media juga dapat berperan sebagai faktor seleksi pertumbuhan. Namun, untuk media uji biokimia, kisaran pH di mana mikroorganisme menunjukkan aktivitas tk dalam substrat lebih sempit daripada kisaran pH yang diperlukan untuk pertumbuhan: oleh karena itu, penting untuk menyesuaikan pH media ke kisaran yang diharapkan. Ketika laboratorium menyiapkan media sesuai dengan komposisi media, pH harus diperiksa dan disesuaikan. Harus diperhatikan bahwa bahkan untuk media dehidrasi sintetik siap pakai yang disediakan oleh pabrikan (khususnya untuk beberapa media dehidrasi stok), pH akhir perlu diukur setelah membuat media percobaan.
Cara paling akurat untuk mengukur pH suatu media adalah dengan pH meter. Sebelum digunakan, harus dikalibrasi dengan larutan buffer standar yang diketahui pH-nya (biasanya pH 4 sampai 7). Bilas elektroda pH meter dengan air suling dan rendam dalam media kultur dalam gelas kimia, lalu baca pH media kultur dari skala pH meter. Setiap produsen menyediakan petunjuk pengoperasian terperinci untuk setiap jenis pH meter.
Saat menyiapkan media kultur, pH dapat dengan mudah diatur dengan menggunakan pH meter dengan pengadukan mekanis. Media kultur harus disiapkan dalam wadah (seperti gelas kimia besar) yang dapat diaduk terus menerus. atau magnet terbungkus teflon. PH media yang mengandung agar perlu diatur setelah pencairan, yang mudah dilakukan dengan pengaduk magnet yang dapat dipanaskan. Saat menyesuaikan pH, gunakan larutan penyangga standar dengan pH yang diketahui untuk mengkalibrasi pengukur pH terlebih dahulu. Kemudian masukkan elektroda komposit dan termometer resistansi (jika ada) ke dalam media, perlahan tambahkan asam klorida dan natrium hidroksida dalam jumlah yang sesuai dari ujung gelas jauh dari elektroda, sehingga media dapat mencapai dan mempertahankan pH yang dibutuhkan.
Kompensasi suhu pH meter harus memperhitungkan pengaruh suhu pada sistem elektroda: dalam beberapa pengenceran dan media, pH sangat berubah dengan suhu. Untuk media cair dan pengenceran, pH biasanya dapat diatur dan diukur baik pada suhu 25 derajat atau pada suhu yang digunakan.
PH media agar harus disesuaikan setelah dilarutkan, dan suhu pelarutan di atas 45 derajat: oleh karena itu, pH media padat harus ditentukan pada suhu penggunaannya. Pada saat ini, elektroda komposit kepala datar harus digunakan, dan kompensasi suhu pH meter harus dikalibrasi secara manual. Saat menyiapkan media kultur, jika ditentukan bahwa pH media kultur berbeda antara keadaan leleh dan keadaan padat, berarti ada kesalahan dalam mengatur pH.
Demikian pula, bila media yang disiapkan disterilkan dengan panas (misalnya, diautoklaf), ia juga dapat mengalami perubahan pH. Untuk media dehidrasi, pabrikan telah mempertimbangkan hal ini, dan biasanya tidak perlu mengatur pH, tetapi pH media yang akan digunakan harus diperiksa secara hati-hati. Jika pH media agar yang didehidrasi harus disesuaikan selama pelarutan ulang atau persiapan, yang terbaik adalah menyesuaikannya dengan asam hidroklorida yang disterilkan dengan filter dan larutan natrium hidroksida setelah langkah sterilisasi untuk menghindari pembentukan media yang terlalu panas. Saat menyiapkan media dengan bahan baku atau obat-obatan yang berbeda, pH media harus diperiksa setelah diautoklaf. Selain itu, jika pH media diketahui berubah sama setelah setiap autoklaf, pH dapat disesuaikan dengan tepat saat menyiapkan media. Namun, masih perlu untuk menentukan pH akhir media setelah sterilisasi.
