Manfaat mikroskop multifoton pemindaian laser ditingkatkan
Mikroskop Multi-Foton Pemindaian Laser merupakan peningkatan besar dalam mikroskop optik, terutama dalam kemampuan untuk mengamati struktur dalam sel dan jaringan hidup dan tetap, dan untuk mendapatkan struktur bidang Z berlapis-lapis yang jelas dan tajam, yaitu irisan optik, dari mana struktur padat tiga dimensi dari spesimen dapat dibangun. Mikroskop konfokal menggunakan sumber cahaya laser yang diperluas untuk memenuhi seluruh bidang fokus belakang lensa objektif, dan kemudian melewati sistem lensa lensa objektif untuk menyatu menjadi titik-titik yang sangat kecil pada bidang fokus spesimen. Bergantung pada bukaan numerik lensa objektif, ukuran diameter titik iluminasi terang adalah sekitar 0.25 ~ 0.8 μm dan kedalamannya sekitar 0.5 ~ 1.5 m. Ukuran titik confocal ditentukan oleh desain mikroskop, panjang gelombang laser, karakteristik lensa objektif, pengaturan keadaan unit pemindaian, dan sifat spesimen. Mikroskop lapangan mempunyai jangkauan iluminasi dan kedalaman iluminasi yang besar, sedangkan mikroskop confocal memusatkan iluminasi ke satu titik fokus pada bidang fokus. Keuntungan paling mendasar dari mikroskop confocal adalah kemampuannya untuk membuat bagian optik halus dari spesimen fluoresen yang tebal (hingga 50 μm atau lebih), dengan ketebalan bagian sekitar 0,5 hingga 1,5 μm. Serangkaian gambar bagian optik dapat diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah menggunakan motor stepper sumbu Z mikroskop. Perolehan informasi gambar dikendalikan pada bidang pertama dan tidak diganggu oleh sinyal yang dipancarkan dari lokasi lain pada spesimen. Setelah menghilangkan efek fluoresensi latar belakang dan meningkatkan rasio signal-to-noise, kontras dan resolusi gambar confocal meningkat secara signifikan dibandingkan gambar fluoresensi penerangan lapangan konvensional. Dalam banyak spesimen, banyak komponen struktural yang rumit saling terkait untuk membentuk sistem yang kompleks, namun setelah bagian optik yang cukup dapat diperoleh, kita dapat merekonstruksinya dalam tiga dimensi menggunakan perangkat lunak. Metode eksperimental ini telah banyak digunakan dalam penelitian biologi untuk menjelaskan hubungan struktural dan fungsional yang kompleks antara sel atau jaringan.
