Mikroskop Confocal Laser - Fitur dan Aplikasi
Mikroskop confocal pemindaian laser (LSCM) adalah jenis mikroskop yang dirancang berdasarkan teknologi fokus konjugasi, yaitu sumber cahaya laser, sampel yang akan diukur, dan detektor semuanya berada pada posisi konjugasi satu sama lain.
Mendasar
Dalam mikroskop umum, bidang bayangan pengamatan diisolasi dari bidang aksial yang berdekatan dengan mencocokkan bidang fokus lensa objektif dengan detektor, sedangkan dalam mikroskop confocal, titik cahaya terbatas difraksi digunakan untuk menerangi sampel dan A lubang jarum digunakan dalam jalur cahaya yang dikumpulkan pada fokus konjugasi titik cahaya untuk menyaring cahaya liar guna menciptakan efek isolasi dan dengan demikian meningkatkan resolusi.
Fitur pencitraan
Pencitraan pemindaian bagian optik
Fitur lain dari mikroskop confocal pemindaian laser adalah teknologi pencitraan pemindaian. Teknologi iluminasi bidang lebar tradisional menerangi seluruh sampel, sehingga gambar dapat ditangkap langsung dengan mata telanjang atau detektor, namun LSCM menggunakan sinar atau beberapa sinar terfokus yang melewati sampel untuk memindai dan mengambil gambar. Gambar yang dihasilkan disebut bagian optik. Berikut ini menunjukkan perbedaan antara metode iluminasi bidang lebar tradisional dan metode iluminasi confocal pemindaian laser.
Oleh karena itu, sebenarnya cara kerja mikroskop confocal modern adalah seperti yang ditunjukkan pada gambar di bawah ini. Cahaya eksitasi yang dipancarkan laser melewati cermin dichroic dan dipindai dalam arah x dan arah y sampel melalui sepasang galvanometer. Eksitasi (atau refleksi) sampel adalah Cahaya memasuki detektor PMT melalui lubang jarum dan direkam, dan gambar pindaian yang direkam direkonstruksi oleh komputer untuk merekonstruksi gambar sampel sebenarnya.
Hasilkan gambar "z-stack" pada bidang fokus yang berbeda
Hanya cahaya yang dipantulkan kembali dari lapisan sampel terkonjugasi yang dapat melewati lubang kecil di jalur pengumpulan cahaya, dan sisa pantulan lapisan sampel yang tidak relevan diblokir oleh lubang kecil tersebut. Hal ini dapat menghasilkan peningkatan resolusi yang signifikan. Perbandingan mikroskop fluoresensi multidimensi dan mikroskop confocal secara berdampingan dari sampel tebal yang sama. Ketika serangkaian gambar diambil pada bidang fokus yang berbeda, gambar yang biasa disebut sebagai "z-stacks" dapat dihasilkan, yang menggambarkan peningkatan resolusi dan kontras yang ditawarkan oleh mikroskop confocal dan penyebab yang mendasari perolehan ini. Terlihat bahwa pemeriksaan gambar di bagian atas tumpukan dengan bidang pencitraan di atas jaringan menunjukkan sejumlah besar cahaya yang tersebar pada gambar fluoresensi, sedangkan gambar mikroskop confocal tampak hitam. Pengurangan PSF aksial ini secara langsung menghasilkan perbedaan resolusi yang diamati pada antarmuka optik di tengah z-stack.
Resolusi jauh lebih baik dibandingkan dengan pencahayaan widefield
Dalam mikroskop fluoresensi, intensitas cahaya yang dipancarkan dari satu titik digambarkan oleh fungsi penyebaran titik (PSF), dan polanya adalah disk Airy. Resolusi sistem fluoresensi dapat digambarkan dengan jari-jari piringan Airy, yang dapat dijelaskan dengan Bukaan numerik lensa objektif dan panjang gelombang cahaya eksitasi menentukan
