Pengetahuan tentang Confocal Fluorescence Microscopy
Prinsip dasar mikroskop fluoresensi confocal: sumber cahaya titik digunakan untuk menyinari spesimen, dan titik cahaya kecil yang terdefinisi dengan baik terbentuk pada bidang fokus. terdiri dari splitter. Pembagi sinar mengirimkan fluoresensi langsung ke detektor. Ada lubang jarum di depan sumber cahaya dan detektor, masing-masing disebut lubang jarum iluminasi dan lubang jarum pendeteksi. Ukuran geometris keduanya sama, sekitar 100-200nm; relatif terhadap titik cahaya pada bidang fokus, keduanya berkonjugasi, yaitu titik cahaya melewati serangkaian lensa, dan akhirnya dapat difokuskan pada lubang jarum iluminasi dan lubang jarum deteksi pada saat yang bersamaan. Dengan cara ini, cahaya dari bidang fokus dapat dikonvergensikan dalam lingkup lubang deteksi, sedangkan cahaya yang tersebar dari atas atau bawah bidang fokus diblokir di luar lubang deteksi dan tidak dapat dicitrakan. Laser memindai sampel titik demi titik, dan tabung pengganda foto setelah mendeteksi lubang jarum juga memperoleh gambar confocal dari titik titik cahaya yang sesuai, yang diubah menjadi sinyal digital dan ditransmisikan ke komputer, dan akhirnya dikumpulkan menjadi jelas gambar confocal dari seluruh bidang fokus pada layar.
Setiap gambar bidang fokus sebenarnya merupakan penampang optik dari spesimen, dan penampang optik ini selalu memiliki ketebalan tertentu, juga dikenal sebagai penampang tipis optik. Karena intensitas cahaya pada titik fokus jauh lebih besar daripada pada titik non-fokus, dan cahaya bidang non-fokus disaring oleh lubang jarum, kedalaman bidang sistem confocal kira-kira nol, dan pemindaian sepanjang Z -axis dapat mewujudkan tomografi optik, membentuk Amati bagian optik dua dimensi pada titik fokus sampel. Menggabungkan pemindaian bidang XY (bidang fokus) dengan pemindaian sumbu Z (sumbu optik), gambar tiga dimensi dari sampel dapat diperoleh dengan mengumpulkan gambar dua dimensi dari lapisan kontinu dan diproses oleh perangkat lunak komputer khusus.
