Perbaikan dalam mikroskop multiphoton pemindaian laser
Mikroskop multiphoton pemindaian laser adalah peningkatan yang signifikan dari mikroskop optik, terutama dimanifestasikan dalam kemampuan untuk mengamati struktur sel yang dalam, sel tetap, dan jaringan, dan mendapatkan struktur z-pesawat multi-lapisan yang jelas dan tajam, yaitu irisan optik, yang dapat digunakan untuk membangun struktur padat tiga dimensional dari spesimen. Mikroskop confocal menggunakan sumber cahaya laser, yang diperluas untuk mengisi seluruh bidang fokus lensa objektif, dan kemudian bertemu menjadi titik yang sangat kecil pada bidang fokus spesimen melalui sistem lensa lensa objektif. Menurut aperture numerik dari lensa objektif, diameter titik iluminasi cerah adalah tentang 0. 25-0. 8 μ m, dan kedalamannya sekitar 0. 5-1. 5 μ m. Ukuran titik confocal ditentukan oleh desain mikroskop, panjang gelombang laser, karakteristik objektif, pengaturan status unit pemindaian, dan sifat spesimen. Kisaran penerangan dan kedalaman mikroskop lapangan besar, sedangkan penerangan mikroskop confocal difokuskan pada titik fokus pada bidang fokus. Keuntungan dasar dari mikroskop confocal adalah bahwa ia dapat melakukan pemasangan optik halus pada spesimen fluoresen tebal (hingga 5 0 μ m atau lebih), dengan ketebalan sekitar 0,5 hingga 1,5 μ m. Seri gambar irisan optik dapat diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah menggunakan motor mikroskop stepper mikroskop. Kumpulan informasi gambar dikendalikan dalam pesawat dan tidak akan diganggu oleh sinyal yang dipancarkan dari posisi lain pada spesimen. Setelah menghilangkan pengaruh fluoresensi latar belakang dan meningkatkan rasio sinyal-ke-noise, kontras dan resolusi gambar confocal secara signifikan ditingkatkan dibandingkan dengan gambar fluoresensi iluminasi medan tradisional. Dalam banyak spesimen, komponen struktural yang rumit menjalin untuk membentuk sistem yang kompleks, tetapi sekali bagian optik yang cukup dapat dikumpulkan, kita dapat menggunakan perangkat lunak untuk merekonstruksi mereka dalam tiga dimensi. Metode eksperimental ini telah banyak digunakan dalam penelitian biologis untuk menjelaskan hubungan struktural dan fungsional yang kompleks antara sel atau jaringan.
