Manfaat Mikroskop Multifoton Pemindaian Laser yang Lebih Baik
Mikroskop multifoton pemindaian laser adalah peningkatan besar dari mikroskop optik, terutama untuk mengamati struktur dalam sel hidup, sel dan jaringan tetap, dan dapat memperoleh struktur bidang Z multi-lapis yang jelas dan tajam, yaitu irisan optik, dan dapat membangun Struktur padat tiga dimensi dari spesimen. Mikroskop confocal menggunakan sumber cahaya laser, yang diperluas hingga memenuhi seluruh bidang fokus belakang lensa objektif, dan kemudian menyatu menjadi titik yang sangat kecil pada bidang fokus spesimen melalui sistem lensa lensa objektif. Bergantung pada bukaan numerik lensa objektif, diameter titik iluminasi paling terang adalah sekitar 0,25 ~ 0,8 μm, dan kedalamannya sekitar 0,5 ~ 1,5 m. Ukuran titik confocal bergantung pada desain mikroskop, panjang gelombang laser, karakteristik lensa objektif, pengaturan keadaan unit pemindaian, dan sifat spesimen. Mikroskop lapangan mempunyai jangkauan dan kedalaman iluminasi yang luas, sedangkan mikroskop confocal mempunyai iluminasi yang terkonsentrasi pada titik fokus pada bidang fokus. Keuntungan paling mendasar dari mikroskop confocal adalah ia dapat melakukan pemotongan optik halus pada spesimen fluoresen tebal (hingga 50 μm atau lebih), dengan ketebalan sekitar 0,5 hingga 1,5 μm. Serangkaian gambar bagian optik dapat diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah menggunakan motor stepper sumbu Z mikroskop. Perolehan informasi gambar dikontrol dalam bidang yang tepat dan tidak akan terganggu oleh sinyal dari lokasi lain pada spesimen. Setelah menghilangkan efek fluoresensi latar belakang dan meningkatkan rasio signal-to-noise, kontras dan resolusi gambar confocal meningkat secara signifikan dibandingkan dengan gambar fluoresensi penerangan lapangan tradisional. Dalam banyak spesimen, banyak komponen struktural yang rumit saling terkait untuk membentuk sistem yang kompleks, namun setelah cukup banyak bagian optik yang dapat dikumpulkan, kita dapat merekonstruksinya dalam 3D melalui perangkat lunak. Pendekatan eksperimental ini telah banyak digunakan dalam penelitian biologi untuk menjelaskan hubungan struktural dan fungsional yang kompleks antara sel atau jaringan.
