Peningkatan keunggulan mikroskop multifoton pemindaian laser
Mikroskop multifoton pemindaian laser merupakan peningkatan penting dari mikroskop optik, yang terutama menunjukkan bahwa ia dapat mengamati struktur dalam sel hidup, sel dan jaringan tetap, dan dapat memperoleh struktur bidang Z multi-lapis yang jelas dan tajam, yaitu irisan optik. , yang dapat digunakan untuk membangun struktur spesimen padat tiga dimensi. Mikroskop confocal menggunakan sumber cahaya laser, yang mengisi seluruh bidang fokus belakang lensa objektif setelah pemuaian, dan kemudian melewati sistem lensa lensa objektif untuk menyatu menjadi titik-titik yang sangat kecil pada bidang fokus spesimen. Menurut bukaan numerik lensa objektif, diameter titik iluminasi paling terang adalah sekitar 0.25 ~ 0.8μm dan kedalamannya sekitar 0.5 ~ 1.5 μ m .. Ukuran fokus kopolimerisasi bergantung pada desain mikroskop, panjang gelombang laser, karakteristik lensa objektif, pengaturan status unit pemindaian, dan sifat spesimen. Kisaran iluminasi dan kedalaman mikroskop lapangan sangat besar, sedangkan iluminasi mikroskop confocal terkonsentrasi pada * * fokus pada bidang fokus. Keuntungan paling mendasar dari mikroskop confocal adalah dapat membuat irisan optik halus dari spesimen fluoresen tebal (yang dapat mencapai 50 μm atau lebih), dan ketebalan irisannya sekitar 0,5 hingga 1,5 μm. Serangkaian gambar irisan optik dapat diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah dengan motor penggerak sumbu Z pada mikroskop. Perolehan informasi gambar dikendalikan pada bidang pertama dan tidak akan diganggu oleh sinyal dari posisi lain pada spesimen. Setelah menghilangkan pengaruh fluoresensi latar belakang dan meningkatkan rasio signal-to-noise, kontras dan resolusi gambar confocal jelas meningkat dibandingkan dengan gambar fluoresensi penerangan lapangan tradisional. Dalam banyak spesimen, banyak komponen struktur rumit yang terjalin untuk membentuk sistem yang kompleks, namun setelah cukup banyak bagian optik yang dapat dikumpulkan, kita dapat merekonstruksinya dalam tiga dimensi dengan perangkat lunak. Metode eksperimental ini telah banyak digunakan dalam penelitian biologi untuk memperjelas hubungan struktural dan fungsional yang kompleks antara sel atau jaringan.
