Peningkatan Keuntungan Pemindaian Laser Multiphoton Microscopy
Pemindaian laser mikroskop multifoton adalah peningkatan besar dari mikroskop optik, terutama untuk mengamati struktur dalam sel hidup, sel dan jaringan tetap, dan dapat memperoleh struktur bidang-Z multi-lapisan yang jelas dan tajam, yaitu, irisan optik, dan dapat membangun Struktur padat tiga dimensi dari spesimen. Mikroskop confocal menggunakan sumber sinar laser, yang diperluas untuk mengisi seluruh bidang fokus belakang lensa objektif, dan kemudian menyatu menjadi titik yang sangat kecil pada bidang fokus spesimen melalui sistem lensa lensa objektif. Bergantung pada apertur numerik lensa objektif, diameter titik iluminasi paling terang adalah sekitar 0.25 ~ 0.8 μm, dan kedalamannya sekitar 0.5 ~ 1.5 μm. Ukuran titik confocal tergantung pada desain mikroskop, panjang gelombang laser, karakteristik lensa objektif, pengaturan keadaan unit pemindaian, dan sifat spesimen. Mikroskop lapangan memiliki rentang iluminasi yang luas dan kedalaman iluminasi yang besar, sedangkan mikroskop confocal memiliki iluminasi yang terkonsentrasi pada titik fokus pada bidang fokus. Keuntungan paling mendasar dari mikroskop confocal adalah dapat melakukan pemotongan optik yang halus pada spesimen fluoresen tebal (hingga 50 μm atau lebih), dengan ketebalan sekitar 0,5 hingga 1,5 μm. Serangkaian gambar bagian optik dapat diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah dengan motor stepper sumbu Z mikroskop. Perolehan informasi citra dikendalikan di dalam bidang dan tidak akan diganggu oleh sinyal dari lokasi lain pada spesimen. Setelah menghilangkan efek fluoresensi latar belakang dan meningkatkan rasio signal-to-noise, kontras dan resolusi gambar confocal meningkat secara signifikan dibandingkan dengan gambar fluoresensi iluminasi medan tradisional. Dalam banyak spesimen, banyak komponen struktural yang rumit terjalin untuk membentuk sistem yang kompleks, tetapi setelah cukup banyak bagian optik yang dapat dikumpulkan, kami dapat merekonstruksinya dalam 3D melalui perangkat lunak. Pendekatan eksperimental ini telah banyak digunakan dalam penelitian biologi untuk menjelaskan hubungan struktural dan fungsional yang kompleks antara sel atau jaringan.
