Cara Memilih Mikroskop Fluoresensi yang Tepat
Mikroskop fluoresensi adalah peralatan pencitraan mikroskopis standar untuk laboratorium dan departemen patologi. Ini menggunakan karakteristik fluoresensi untuk observasi dan pencitraan. Ini banyak digunakan dalam biologi sel, neurobiologi, botani, mikrobiologi, patologi, genetika dan bidang lainnya. Pencitraan fluoresensi memiliki keunggulan sensitivitas tinggi dan spesifisitas tinggi, dan sangat cocok untuk pengamatan distribusi protein dan organel spesifik dalam jaringan dan sel, studi kolokalisasi dan interaksi, pelacakan proses dinamis kehidupan seperti perubahan konsentrasi ion , dll.
Pilihan Mikroskop
Mikroskop fluoresensi terutama dibagi menjadi tiga kategori: mikroskop fluoresensi tegak (cocok untuk pemotongan), mikroskop fluoresensi terbalik (cocok untuk sel hidup, dengan mempertimbangkan pemotongan), mikroskop fluoresensi stereoskopis (cocok untuk spesimen yang lebih besar, seperti tumbuhan, ikan zebra (dewasa/ embrio), medaka, organ tikus/tikus, dll).
Pemilihan Kubus Filter Fluoresensi
Selain mempertimbangkan panjang gelombang eksitasi dan emisi probe fluoresen, pemilihan blok filter juga perlu mempertimbangkan apakah ada eksitasi non-spesifik dan warna silang untuk sampel berlabel multi-warna. Dalam percobaan, kami akan mencoba memilih panjang gelombang yang paling dekat dengan puncak eksitasi untuk eksitasi, dan jangkauan penerima harus menyertakan puncak emisi. Misalnya, puncak eksitasi Alexa Fluor 488 adalah 500 nm, dan filter eksitasi 480/40 dapat dipilih dalam mikroskop fluoresensi. Kubus filter fluoresensi yang biasa digunakan dalam mikroskop fluoresensi dapat dibagi menjadi dua jenis: long pass (LP untuk pendek) dan band pass (BP untuk pendek), yang juga perlu dipilih sesuai kebutuhan.
Pilihan sumber cahaya neon
Sumber cahaya neon yang umum digunakan saat ini antara lain lampu merkuri, lampu halida logam, dan sumber cahaya LED yang telah berkembang pesat dalam beberapa tahun terakhir. Spektrum sumber cahaya fluoresen kontinu dan terputus-putus, dan energinya akan berbeda di pita yang berbeda. Karena pita spektralnya yang relatif sempit, keluaran energi yang lebih stabil, umur panjang, keamanan dan perlindungan lingkungan dan banyak keuntungan lainnya, sumber cahaya LED secara bertahap menjadi sumber cahaya utama mikroskop fluoresensi.
mikroskop konfokal
Dalam pengamatan mikroskop fluoresensi tradisional, karena tumpang tindih zat penanda fluoresensi dan struktur autofluoresensi, keduanya digabungkan secara erat, sedangkan lensa objektif mikroskop epi-fluoresensi tradisional tidak hanya mengumpulkan cahaya dari bidang fokus, tetapi juga mengumpulkan cahaya yang tersebar di atas dan di bawah. bidang fokus , menghasilkan resolusi dan kontras gambar yang sangat berkurang.
Pencitraan confocal memecahkan masalah ini dengan hanya mendeteksi bagian cahaya yang dipantulkan dari bidang fokus. Sumber cahaya melewati lubang jarum untuk membentuk titik cahaya kecil dan halus pada bidang fokus. Cahaya yang dipancarkan dari bidang fokus dikumpulkan oleh lensa objektif. Sebagian besar fluoresensi yang dipancarkan dari titik di atas atau di bawah bidang fokus lensa objektif tidak dapat menyatu ke lubang kecil. Hanya fluoresensi yang terletak di bidang fokus dan sebagian kecil dari fluoresensi tidak fokus yang dapat melewati lubang jarum, sedangkan berkas cahaya di luar bidang fokus menyatu di bagian depan atau belakang pelat lubang jarum dan diblokir agar tidak memasuki detektor melalui lubang jarum. Gambar yang terdeteksi adalah gambar dari bidang fokus, sehingga kualitas gambar akhir sangat meningkat.
Karena keuntungan dan kepraktisan fungsi mikroskop confocal pemindaian laser, mikroskop confocal adalah asisten eksperimental yang sangat diperlukan di bidang biologi sel presisi tinggi, botani dan penelitian sel. Pada saat yang sama, Di masa depan pusat penelitian ilmiah akan menjadi alat penelitian ilmiah yang paling dasar dan inti.
