Metode deteksi mikroskop fluoresensi
mikroskop fluoresensi
Mikroskop fluoresensi adalah alat mendasar untuk sitokimia imunofluoresensi. Ini terdiri dari komponen utama seperti sumber cahaya, sistem pelat filter, dan sistem optik. Ia menggunakan panjang gelombang cahaya tertentu untuk merangsang spesimen dan memancarkan fluoresensi, yang diperbesar melalui sistem objektif dan lensa okuler untuk mengamati gambar fluoresensi spesimen (Gambar 1).
(1) Sumber cahaya
Saat ini, lampu merkuri bertekanan sangat tinggi 200W umumnya digunakan sebagai sumber cahaya. Itu terbuat dari kaca kuarsa, dengan bentuk bulat di tengah dan sejumlah merkuri terisi di dalamnya. Selama pengoperasian, pelepasan muatan antara dua elektroda menyebabkan merkuri menguap, dan tekanan di dalam bola meningkat dengan cepat. Ketika merkuri menguap seluruhnya, ia dapat mencapai tekanan atmosfer standar 50-70, yang biasanya memerlukan waktu sekitar 5-15 menit. Pendaran lampu merkuri bertekanan sangat tinggi adalah hasil pelepasan antar elektroda, yang terus menerus terdisosiasi dan mereduksi molekul merkuri dan memancarkan foton. Ia memancarkan sinar ultraviolet dan biru violet yang kuat, yang cukup untuk merangsang berbagai zat fluoresen, oleh karena itu, ia banyak digunakan dalam mikroskop fluoresensi.
Tindakan pencegahan untuk menggunakan mikroskop fluoresensi
(1) Ikuti dengan ketat instruksi dari pabrik mikroskop fluoresensi dan jangan mengubah program secara sembarangan.
(2) Pemeriksaan sebaiknya dilakukan di ruangan gelap. Setelah memasuki kamar gelap, sambungkan listrik dan nyalakan lampu merkuri bertekanan sangat tinggi selama 5-15 menit. Setelah sumber cahaya memancarkan cahaya yang kuat dan stabil, mata harus beradaptasi sepenuhnya dengan kamar gelap sebelum mulai mengamati spesimen.
(3) Untuk mencegah kerusakan akibat sinar UV pada mata, kacamata pelindung harus dipakai saat mengatur sumber cahaya.
(4) Waktu pemeriksaan harus 1-2 jam setiap kali pemeriksaan. Jika melebihi 90 menit, intensitas cahaya lampu merkuri bertekanan sangat tinggi secara bertahap menurun dan fluoresensi melemah; Spesimen terkena radiasi ultraviolet selama 3-5 hari
Setelah beberapa menit, fluoresensi juga menurun secara signifikan; Jadi, durasi maksimalnya tidak boleh melebihi 2-3 jam.
(5) Masa pakai sumber cahaya mikroskop fluoresen terbatas, dan spesimen harus diperiksa secara terpusat untuk menghemat waktu
Hemat waktu dan lindungi sumber cahaya. Saat cuaca panas, kipas angin listrik harus ditambahkan untuk menghilangkan panas dan mendinginkan. Saat mengganti bola lampu baru, sebaiknya catat waktu pemakaiannya dari awal. Saat lampu dimatikan dan Anda ingin menggunakannya kembali, Anda harus menunggu hingga bola lampu cukup dingin sebelum menyalakannya. Hindari menyalakan sumber cahaya beberapa kali sehari.
(6) Amati spesimen segera setelah pewarnaan, karena fluoresensi secara bertahap akan melemah seiring waktu. Jika spesimen disimpan dalam kantong plastik polietilen pada suhu 4 derajat, hal ini dapat menunda waktu redaman fluoresensi dan mencegah penguapan bahan pemasangan.
(7) Kriteria penilaian kecerahan fluoresensi secara umum dibagi menjadi empat tingkatan, yaitu "satu" - tidak ada atau terlihat fluoresensi lemah. "+" - Hanya fluoresensi yang terlihat yang terlihat. ++- Terlihat dengan fluoresensi terang. "+++" - Fluoresensi terlihat dan mempesona.
