Perbedaan dan karakteristik mikroskop fluoresensi dan mikroskop optik biasa
Mikroskop fluoresensi dan mikroskop optik biasa berbeda, tidak melalui penerangan sumber cahaya biasa untuk mengamati spesimen, namun penggunaan panjang gelombang cahaya tertentu (biasanya ultraviolet, cahaya biru-ungu) eksitasi bahan fluoresen dalam spesimen di bawah mikroskop, sehingga fluoresensi sumber cahaya mikroskop fluoresensi tidak berperan sebagai penerangan langsung, tetapi sebagai semacam eksitasi bahan fluoresen dalam spesimen sumber energi. Alasan mengapa kita dapat mengamati spesimen bukan karena iluminasi sumber cahaya, tetapi fenomena fluoresensi yang dihadirkan oleh bahan fluoresen pada spesimen setelah menyerap energi cahaya eksitasi. Terlihat bahwa karakteristik mikroskop fluoresensi, terutama sumber cahayanya dapat mensuplai sejumlah besar rentang panjang gelombang tertentu dari cahaya eksitasi, sehingga bahan fluoresen dalam spesimen yang diperiksa dapat memperoleh intensitas cahaya eksitasi yang diperlukan. Pada saat yang sama, mikroskop fluoresensi harus memiliki sistem filter yang sesuai. Mikroskop fluoresensi adalah alat dasar untuk histokimia fluoresensi. Ini terdiri dari sumber cahaya bertekanan sangat tinggi, sistem filter (termasuk pelat filter eksitasi dan penekan), sistem optik dan sistem fotografi dan komponen utama lainnya, adalah penggunaan panjang gelombang cahaya tertentu untuk merangsang spesimen memancarkan fluoresensi.
1. cara eksitasi fluoresensi: menurut rentang panjang gelombang cahaya dibagi menjadi metode eksitasi UV (menggunakan iluminasi ultraviolet) dan metode eksitasi BV (menggunakan cahaya biru violet) dua jenis metode eksitasi UV lebih pendek dari 400nm sinar ultraviolet dekat untuk perangsangan. Tidak ada cahaya eksitasi yang terlihat dalam metode ini, sehingga fluoresensi yang diamati menunjukkan fluoresensi yang melekat pada pewarna, dan mudah untuk membedakan fluoresensi spesifik pada spesimen dari fluoresensi diri jaringan latar belakang.
2. Metode eksitasi BV: Metode ini berpusat pada 404nm, 434nm dari ultraviolet hingga cahaya biru untuk eksitasi. Metode ini menggunakan cahaya biru untuk menyinari spesimen, sehingga filter pemutus sistem pengamatan fluoresensi harus menggunakan filter yang dapat memblokir cahaya biru sepenuhnya dan dapat melewatkan fluoresensi hijau dan kuning yang diinginkan secara memadai. Pigmen fluoresen untuk metode antibodi fluoresen. Karena panjang gelombang serapan maksimum cahaya eksitasi dan panjang gelombang emisi maksimum fluoresensi berdekatan satu sama lain, filter yang digunakan dalam metode eksitasi BV harus berupa filter potong tajam. Metode ini menggunakan cahaya biru sebagai cahaya eksitasi, sehingga efisiensi penyerapan fluorokrom lebih tinggi dan diperoleh gambar yang lebih terang. Kerugiannya adalah fluoresensi di bawah 500 nm tidak dapat dilihat, dan di atas 500 nm seluruh gambar tampak kuning. Dalam metode antibodi fluoresen, sebagian besar spesifisitas dinilai berdasarkan warna unik fluorokrom, sehingga kelemahan metode eksitasi BV yang dijelaskan di atas cenderung sangat berpengaruh ketika membahas spesifisitas yang tidak kentara.
