Metode Pencacahan Mikroorganisme Secara Langsung Menggunakan Mikroskop
Menggunakan hemositometer untuk menghitung mikroorganisme secara langsung di bawah mikroskop adalah metode yang umum digunakan untuk penghitungan mikroba. Keuntungan metode ini adalah intuisi dan kecepatannya. Tempatkan suspensi bakteri (atau suspensi spora) yang telah diencerkan dalam ruang hitung di antara kaca objek hemositometer dan kaca penutup, lalu hitung di bawah mikroskop. Karena volume ruang hitung yang konstan (0,1 mm2), jumlah total mikroorganisme per satuan volume dapat dikonversi berdasarkan jumlah mikroorganisme yang diamati di bawah mikroskop. Karena metode ini menghitung jumlah sel bakteri hidup dan mati, maka metode ini juga dikenal sebagai metode penghitungan bakteri total.
Pelat penghitung sel darah biasanya berupa kaca objek yang dirancang khusus dengan empat alur yang membentuk tiga platform. Platform tengah dibagi dua oleh alur horizontal pendek, dan setiap sisi platform diukir dengan kisi-kisi. Setiap kotak dibagi menjadi sembilan kotak besar, dan kotak besar di tengahnya merupakan ruang hitung, tempat dilakukan penghitungan mikroba. Struktur pelat hitung sel darah ditunjukkan pada Gambar VIII-1.
Umumnya ada dua spesifikasi untuk skala ruang hitung. Salah satunya adalah sebuah persegi besar dibagi menjadi 16 kotak tengah, dan masing-masing kotak tengah dibagi lagi menjadi 25 kotak kecil (Gambar VIII -2); Cara lainnya adalah dengan membagi sebuah kotak besar menjadi 25 kotak tengah, dan masing-masing kotak tengah dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil (Gambar VIII -1, C). Namun berapapun ukuran papan hitungnya, banyaknya kotak kecil pada setiap kotak besar adalah sama, yaitu 16 × 25=400 kotak kecil, seperti terlihat pada Gambar VIII-2.
Jika panjang sisi setiap persegi besar adalah 1 mm, maka luas setiap persegi besar adalah 1 mm2. Setelah ditutup dengan kaca penutup, tinggi antara kaca objek dan kaca penutup adalah 0,1 mm, jadi volume ruang hitung adalah 0,1 mm3.
Saat menghitung, jumlah total bakteri dalam lima kotak biasanya dihitung, dan kemudian diperoleh nilai rata-rata setiap kotak. Mengalikannya dengan 16 atau 25 menghasilkan jumlah total bakteri dalam kuadrat besar, yang kemudian diubah menjadi jumlah total bakteri dalam 1 ml larutan bakteri.
