Perbedaan antara mikroskop fluoresensi dan mikroskop confocal
Mikroskop fluoresensi
1. Mikroskop fluoresensi menggunakan cahaya ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk menyinari objek yang sedang diperiksa, menyebabkannya memancarkan fluoresensi, dan kemudian mengamati bentuk dan posisi objek di bawah mikroskop. Mikroskop fluoresensi digunakan untuk mempelajari penyerapan, transportasi, distribusi, dan lokalisasi zat dalam sel. Beberapa zat dalam sel, seperti klorofil, dapat melakukan fluorese ketika terpapar radiasi ultraviolet; Ada juga beberapa zat yang tidak dapat memancarkan fluoresensi itu sendiri, tetapi juga dapat memancarkan fluoresensi jika diwarnai dengan pewarna fluoresen atau antibodi fluoresen dan diiradiasi dengan sinar ultraviolet. Mikroskop fluoresensi adalah salah satu alat untuk penelitian kualitatif dan kuantitatif pada zat tersebut.
2. Prinsip mikroskop fluoresensi:
(A) Sumber Cahaya: Sumber cahaya memancarkan cahaya dari berbagai panjang gelombang (dari ultraviolet ke inframerah).
(B) Sumber Cahaya Filter Eksitasi: Mentransmisikan cahaya dari panjang gelombang tertentu yang dapat menyebabkan fluoresensi dalam spesimen, sambil memblokir cahaya yang tidak berguna untuk fluoresensi yang menarik.
(C) Spesimen fluoresen: biasanya diwarnai dengan pigmen fluoresen.
(D) Filter Pemblokiran: Secara selektif mentransmisikan fluoresensi dengan memblokir lampu eksitasi yang tidak diserap oleh spesimen, dan beberapa panjang gelombang dalam fluoresensi juga ditransmisikan secara selektif. Mikroskop yang menggunakan cahaya ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk membuat objek yang diterangi memancarkan fluoresensi. Mikroskop elektron pertama kali dirakit oleh Knorr dan Hauska di Berlin, Jerman pada tahun 1931. Mikroskop ini menggunakan balok elektron berkecepatan tinggi alih-alih balok cahaya. Karena panjang gelombang yang jauh lebih pendek dari aliran elektron dibandingkan dengan gelombang cahaya, pembesaran mikroskop elektron dapat mencapai 8 0 0000 kali, dengan batas resolusi minimum 0,2 nanometer. Mikroskop elektron pemindaian, yang pertama kali digunakan pada tahun 1963, memungkinkan orang untuk melihat struktur kecil di permukaan benda.
3. Lingkup Aplikasi: Digunakan untuk memperbesar gambar objek kecil. Umumnya digunakan untuk pengamatan biologi, kedokteran, partikel mikroskopis, dll.
mikroskop confocal
1. Mikroskop confocal menambahkan setengah lensa setengah reflektif ke jalur cahaya yang dipantulkan, yang membelokkan cahaya yang dipantulkan yang telah melewati lensa ke arah lain. Pada titik fokusnya, ada baffle dengan lubang jarum yang terletak di titik fokus, dan di belakang baffle adalah tabung photomultiplier. Dapat dibayangkan bahwa cahaya yang dipantulkan sebelum dan sesudah fokus lampu deteksi tidak dapat difokuskan pada lubang kecil melalui sistem confocal ini dan akan diblokir oleh membenci. Jadi fotometer mengukur intensitas cahaya yang dipantulkan pada titik fokus.
2. Prinsip: Mikroskop optik tradisional menggunakan sumber cahaya lapangan, dan gambar setiap titik pada spesimen dipengaruhi oleh difraksi atau cahaya yang tersebar dari titik tetangga; Mikroskop confocal pemindaian laser menggunakan sinar laser untuk menerangi lubang jarum dan membentuk sumber cahaya titik untuk memindai setiap titik pada bidang fokus spesimen. Titik yang diterangi pada spesimen dicitrakan di lubang jarum deteksi, dan diterima titik atau garis oleh tabung photomultiplier (PMT) atau perangkat kopling dingin (CCCD) setelah mendeteksi lubang jarum, dengan cepat membentuk gambar fluoresensi pada layar monitor komputer. Lubang jarum iluminasi dan lubang jarum deteksi konjugasi relatif terhadap bidang fokus lensa objektif. Titik -titik pada bidang fokus secara bersamaan berfokus pada lubang jarum iluminasi dan lubang jarum emisi, dan titik di luar bidang fokus tidak akan dicitrakan di lubang jarum deteksi. Gambar confocal yang dihasilkan adalah penampang optik dari spesimen, mengatasi kerugian gambar kabur dalam mikroskop umum.
