Perbedaan antara mikroskop fluoresensi dan mikroskop confocal laser
mikroskop fluoresen
1. Mikroskop fluoresensi menggunakan sinar ultraviolet sebagai sumber cahayanya, yang digunakan untuk menyinari benda yang terdeteksi hingga memancarkan fluoresensi, kemudian mengamati bentuk dan posisi benda tersebut di bawah mikroskop. Mikroskop fluoresensi digunakan untuk mempelajari penyerapan, transportasi, distribusi dan lokasi zat kimia dalam sel. Beberapa zat dalam sel, seperti klorofil, dapat berpendar setelah disinari sinar ultraviolet; Zat lain tidak dapat berfluoresensi dengan sendirinya, tetapi dapat berfluoresensi setelah diwarnai dengan pewarna fluoresen atau antibodi fluoresen dan disinari dengan sinar ultraviolet. Mikroskop fluoresensi merupakan salah satu alat untuk penelitian kualitatif dan kuantitatif terhadap zat-zat tersebut.
2, prinsip mikroskop fluoresensi:
(a) Sumber cahaya: Sumber cahaya memancarkan cahaya dengan berbagai panjang gelombang (dari ultraviolet hingga inframerah).
(b) Sumber cahaya filter eksitasi: mentransmisikan cahaya dengan panjang gelombang tertentu yang dapat membuat sampel berpendar, sekaligus menghalangi cahaya yang tidak berguna untuk fluoresensi eksitasi.
(c) Spesimen berpendar: umumnya diwarnai dengan pigmen berpendar.
(d) Filter pemblokiran: pemblokiran cahaya eksitasi yang tidak diserap oleh spesimen untuk mentransmisikan fluoresensi secara selektif, dan beberapa panjang gelombang dalam fluoresensi juga ditransmisikan secara selektif. Mikroskop yang menggunakan sinar ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk membuat benda yang disinari memancarkan fluoresensi. Mikroskop elektron pertama kali dirakit oleh Knohl dan Ha Roska di Berlin pada tahun 1931. Mikroskop ini menggunakan berkas elektron berkecepatan tinggi sebagai pengganti berkas cahaya. Karena panjang gelombang aliran elektron jauh lebih pendek dibandingkan gelombang cahaya, perbesaran mikroskop elektron dapat mencapai 800 ribu kali, dan batas resolusi minimum adalah 0,2 nanometer. Mikroskop elektron pemindai yang mulai digunakan pada tahun 1963 dapat membuat orang melihat struktur kecil di permukaan benda.
3. Lingkup aplikasi: digunakan untuk memperbesar gambar benda kecil. Hal ini umumnya diterapkan pada pengamatan biologi, kedokteran dan partikel mikroskopis.
Mikroskop konfokal
1. Mikroskop confocal menambahkan semi-lensa semi-reflektif pada jalur optik cahaya yang dipantulkan, yang membiaskan cahaya pantulan yang melewati lensa ke arah lain. Pada fokusnya terdapat penyekat dengan lubang jarum, dan lubang jarum terletak pada fokusnya. Di belakang penyekat terdapat tabung pengganda foto. Dapat dibayangkan bahwa cahaya yang dipantulkan sebelum dan sesudah fokus cahaya pendeteksi melewati sistem confocal ini, dan tidak akan terfokus pada lubang kecil tersebut, melainkan akan terhalang oleh penyekat. Jadi fotometer mengukur intensitas cahaya yang dipantulkan pada fokusnya.
2. Prinsip: Mikroskop optik tradisional menggunakan sumber cahaya lapangan, dan gambar setiap titik pada spesimen akan terganggu oleh difraksi atau hamburan cahaya dari titik-titik yang berdekatan; Mikroskop confocal pemindaian laser memindai setiap titik bidang fokus dalam spesimen dengan menggunakan sumber cahaya titik yang dibentuk oleh sinar laser yang melewati lubang jarum iluminasi. Titik iradiasi pada spesimen dicitrakan pada lubang jarum pendeteksi, yang diterima titik demi titik atau garis demi titik oleh tabung fotomultiplier (PMT) atau perangkat berpasangan dingin (cCCD) setelah lubang jarum terdeteksi, dan gambar fluoresen dengan cepat terbentuk pada lubang jarum. layar monitor komputer. Lubang jarum iluminasi dan lubang jarum pendeteksi berkonjugasi terhadap bidang fokus lensa objektif, dan titik-titik pada bidang fokus fokus pada lubang jarum iluminasi dan lubang jarum emisi pada saat yang sama, dan titik-titik di luar bidang fokus tidak akan dicitrakan pada lubang jarum deteksi, sehingga gambar confocal yang diperoleh adalah penampang optik spesimen, yang mengatasi cacat gambar kabur pada mikroskop biasa.
3. Bidang aplikasi: melibatkan kedokteran, penelitian hewan dan tumbuhan, biokimia, bakteriologi, biologi sel, jaringan dan embrio, ilmu pangan, genetika, farmakologi, fisiologi, optik, patologi, botani, ilmu saraf, biologi kelautan, ilmu material, ilmu elektronik, mekanika, geologi perminyakan dan mineralogi.
