Penentuan jumlah mikroorganisme - metode penghitungan langsung mikroskopis!
Mendasar
Metode penghitungan langsung mikroskopis adalah metode yang sederhana, cepat, dan intuitif dengan menempatkan sejumlah kecil suspensi sampel yang akan diuji pada kaca objek khusus (disebut juga penghitung bakteri) dengan luas dan volume tertentu, dan menghitung langsung di bawah sebuah mikroskop. Saat ini, penghitung bakteri yang umum digunakan di dalam dan luar negeri antara lain: papan hitung sel darah, penghitung bakteri Peteroff-Hauser dan penghitung bakteri Hawksley, dll. Semuanya dapat digunakan untuk menghitung suspensi seperti ragi, bakteri, dan spora jamur, dan prinsip dasarnya sama. Dua penghitung bakteri terakhir memiliki volume total 0.02mm3 setelah ditutup dengan kaca penutup, dan jarak antara kaca penutup dan slide hanya 0,02 mm, sehingga sel-sel kecil seperti bakteri dapat diamati dan dihitung dengan lensa objektif imersi minyak. Selain menggunakan penghitung bakteri tersebut, juga terdapat metode estimasi dengan mengamati langsung perbandingan luas apusan dengan luas lapang pandang di bawah mikroskop. Metode ini umumnya digunakan untuk pemeriksaan bakteriologis susu. Keuntungan metode penghitungan mikroskop langsung adalah intuitif, cepat dan mudah dioperasikan. Namun kelemahan cara ini adalah hasil yang diukur biasanya berupa penjumlahan bakteri mati dan bakteri hidup. Saat ini, terdapat beberapa metode untuk mengatasi kekurangan tersebut, seperti menggabungkan bakteri hidup dengan pewarnaan kultur ruang mikro (waktu singkat) dan menambahkan penghambat pembelahan sel untuk mencapai tujuan menghitung hanya bakteri hidup.
Pada percobaan ini digunakan hemositometer sebagai contoh untuk melakukan penghitungan langsung di bawah mikroskop. Untuk cara penggunaan kedua penghitung bakteri lainnya, silakan mengacu pada petunjuk dari masing-masing produsen. Penghitungan langsung di bawah mikroskop dengan hemositometer merupakan metode penghitungan mikroba yang umum digunakan. Papan hitung adalah slide kaca yang dibuat khusus, di mana empat slot membentuk tiga platform; platform yang lebih luas di tengah dibagi menjadi dua bagian dengan slot horizontal pendek, dan setiap sisi platform dilapisi dengan kisi-kisi. Setiap kotak dibagi menjadi sembilan kotak besar, dan kotak besar di tengah adalah ruang hitung. Skala ruang hitung umumnya mempunyai dua spesifikasi, yaitu persegi besar dibagi menjadi 25 kotak tengah, dan setiap kotak tengah dibagi menjadi 16 kotak kecil; yang lainnya adalah sebuah kotak besar dibagi menjadi 16 kotak tengah, dan masing-masing kotak tengah dibagi menjadi 25 kotak kecil, tapi apa pun jenis papan hitungnya, ada 400 kotak kecil di dalamnya setiap kotak besar. Panjang sisi setiap persegi besar adalah 1 mm, lalu luas setiap persegi besar adalah 1 mm 2. Setelah kaca penutup ditutup, tinggi antara kaca penutup dan kaca geser adalah 0,1 mm, jadi volume persegi tersebut ruang hitung adalah 0,1 mm (sepersepuluh ribu mililiter).
