Jelaskan secara rinci langkah-langkah pemilihan dan metode probe fluoresen untuk mikroskop confocal
Dalam percobaan dengan mikroskop confocal, beberapa indikator eksperimental dapat dideteksi menggunakan autofluoresensi sampel itu sendiri atau zat eksogen, tetapi sebagian besar zat yang akan diuji tidak memiliki fluoresensi terukur dan perlu diberi label dengan probe fluoresen. Ini memiliki sinyal fluoresen terukur. Jadi, bagaimana cara memilih probe fluoresen untuk mikroskop confocal?
1. Menentukan indikator yang akan diuji sesuai dengan tujuan percobaan
Setelah indeks deteksi ditentukan, rentang pemilihan probe fluoresen juga ditentukan. Dapat dilihat bahwa pilihan probe fluoresen mana yang akan digunakan dalam percobaan ditentukan oleh tujuan percobaan. Misalnya, jika tujuan percobaan adalah untuk mempelajari perubahan ion kalsium dalam kardiomiosit saat terjadi fibrilasi atrium, dapat ditentukan bahwa zat yang akan diuji adalah ion kalsium dalam kardiomiosit, dan rentang pemilihan probe fluoresen terbatas pada probe ion kalsium yang dapat memberi label sel hidup. Jarum.
2. Tentukan rentang probe fluoresen yang tersedia
Untuk zat atau indikator eksperimental baru, jika tujuan eksperimen bukan untuk mengeksplorasi probe fluoresen baru, Anda dapat memilih untuk menerapkan probe matang dan metode pelabelan. Jenis atau kisaran probe fluoresen yang dapat memberi label pada zat yang akan diuji dapat ditentukan dengan mencari literatur resmi atau katalog produk dari perusahaan reagen terkenal di dalam dan luar negeri.
3. Selidiki apakah karakteristik probe fluoresen memenuhi persyaratan untuk penyiapan sampel fluoresen
Karakteristik probe fluoresen secara langsung memengaruhi pelabelan sampel dan hasil eksperimen. Oleh karena itu, sebelum memilih probe fluoresen dan memberi label sampel dalam percobaan, perlu untuk memahami sepenuhnya karakteristik fluoresensinya. Karakteristik probe fluoresen yang akan diselidiki meliputi:
1. Karakteristik reaksi probe cahaya dan sampel
2. Sensitivitas dan intensitas fluoresensi probe fluoresen
3. Sifat spektral sampel yang diberi label dengan probe fluoresen
4. Stabilitas fluoresensi
5. Interaksi antara beberapa fluoresensi dalam sampel
