Biomikroskopi Mengenai Volume Blok Jaringan
Mikroskopi Biologis Sejauh ini, fiksasi dingin, bagian ultrathin beku dan pengeringan beku adalah metode rutin untuk mikroseksi sinar-x jaringan dan sel. Detail metode ini dijelaskan sebagai berikut:
Untuk mikroskop biologis dengan kondensor, kondensor dapat digerakkan ke atas dan ke bawah untuk membuat kecerahannya sedang, dan bukaan lampu variabel juga dapat diubah untuk mencapai kecerahan 9b yang sedang. Jika cahayanya cerah, kondensor dapat dinaikkan dengan tepat, dan bukaan sumber cahaya variabel dapat diperbesar dengan tepat. Jika cahayanya terlalu kuat, lensa kondensor dapat diturunkan dengan tepat, dan bukaan cahaya yang berpotongan dapat dikurangi dengan tepat. Jika Anda masih merasa menyilaukan dalam hal ini, Anda dapat memilih filter yang sesuai dan meletakkannya di braket di bawah kondensor. Oak ini akan bisa mendapatkan kecerahan yang memuaskan Anda. Tentu saja, menyesuaikan posisi atas dan bawah kondensor, menyesuaikan ukuran apertur pembacaan optik variabel, dan memilih filter yang sesuai memerlukan periode latihan tertentu untuk mendapatkan pengalaman.
Masalah yang sangat penting dalam mikroskop biologis adalah bahwa dalam proses pengambilan sampel dan pemisahan sel, setelah pengeringan beku dan penyisipan resin (FD), setelah pembekuan agregat ultra-tipis, dan setelah pengeringan beku, kandungan 65 elemen di setiap bagian harus hati-hati ditangani. Sel-sel yang akan dianalisis tidak boleh rusak. Karena mikroanalisis sinar-X tidak hanya melibatkan banyak langkah, tetapi juga membutuhkan banyak biaya. Jika sel yang dianalisis adalah sel yang rusak atau sel mati setelah waktu yang lama dan pemrosesan multi langkah, sangat disayangkan untuk menarik kesimpulan yang salah. Sebagai contoh, kardiomiosit yang dipisahkan dengan pengobatan kolagenase memiliki dua bentuk, satu batang panjang
Biomikroskopi Jumlah dan distribusi elektrolit dalam kedua jenis sel ini sangat berbeda. Na sangat tinggi dan K sangat rendah pada kardiomiosit sirkular, dan konsentrasi Ca pada nematoda sangat tinggi. Setelah dicek dengan metode analisis lain, terbukti bahwa tingginya Na dan rendahnya K pada sel bulat serta tingginya Ca pada mitokondria disebabkan karena rusaknya membran sel pada saat proses pemisahan sel. Metode fiksasi dingin sel dan jaringan biasanya mengadopsi pendinginan dan fiksasi terlebih dahulu, dan kemudian menyimpannya dalam nitrogen cair. Fiksasi pendinginan sangat penting untuk efek pengawetan. Sel hidup atau jaringan segar kaya akan air. Saat pendinginan, bagian sel atau jaringan yang bersentuhan langsung dengan refrigeran yang dihancurkan (terutama saat pendinginan dengan nitrogen cair) seringkali dibekukan dan diperbaiki terlebih dahulu, sehingga membentuk "cangkang", yang menghalangi bagian tengah sel. dihancurkan dan difiksasi dingin. Oleh karena itu, ketika melakukan analisis area mikro garis-X, sering ditemukan kristal es di tengah sel yang lebih besar. Untuk mencegah hal ini terjadi, zat dengan titik leleh lebih tinggi dari nitrogen cair tetapi lebih rendah dari 806c digunakan sebagai refrigeran rusak. Ada banyak zat seperti itu, tetapi yang paling mudah diperoleh, yang termurah adalah propana pekat (titik didih - 42.120c, titik leleh - 187.10c, berat molekul 44.1), dan kecepatan pendinginan tercepat . Tetapi kerugiannya adalah mudah terbakar.
Mikroskop biologis dapat meletakkan serat otot pada rak khusus, sehingga ketika kontraksi serat otot mencapai fase tertentu dan perlu diperbaiki, segera nyalakan nosel untuk menyemprotkan propana cair ke serat otot untuk memadamkan dan memperbaikinya. Kemudian serabut otot beserta kerangkanya dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam nitrogen cair. Jika memperbaiki sel darah atau sel yang diisolasi, pertama-tama konsentrasikan sel dengan sentrifugasi pada kecepatan rendah, pindahkan sel ke vial perak dengan konduktivitas termal yang baik, tempatkan vial dalam propana cair, dan bekukan untuk fiksasi. Saat memperbaiki pankreas tikus di laboratorium Hall, dua balok baja didinginkan sebelumnya dengan helium cair (atau nitrogen cair), dan dua balok tembaga dijepit dengan tang dan ditempatkan di bagian depan dan belakang pankreas untuk memadamkan dan memperbaiki. pankreas. Jaringan atau sel dapat disimpan dalam nitrogen cair untuk penyimpanan jangka panjang setelah pendinginan dan fiksasi.
Mikroskopi Biologi Selain metode bagian ultrathin beku yang paling dihormati saat ini, berikut adalah teknik pengendapan lain yang digunakan oleh para ilmuwan. Suatu zat ditambahkan untuk membentuk sedimen dengan komponen yang akan dianalisis untuk melumpuhkannya sebelum dianalisis, dan sedimen tersebut kemudian dianalisis. Misalnya, orang sering menggunakan oksalat dan piroantimonat untuk menyimpan Ca di sel otot. Yang pertama tidak cukup peka terhadap konsentrasi Ca yang rendah dalam sitoplasma; pyroantimonate lebih sensitif dan dapat membentuk endapan padat elektron dengan Ca bebas di otak, tetapi pyroantimonate tidak kompatibel dengan natrium, mangan, barium, besi Deposit juga terbentuk dan kurang spesifik. Proses persiapan spesimen mirip dengan persiapan spesimen bagian ultrathin mikroskop elektron transmisi biasa, perbedaannya adalah bahwa 3 persen potasium pyroantimonate (salin buffer fosfat, pH 7,6) difiksasi selama 6 jam sebelum fiksasi, dan pada bagian ultrathin otot yang diwarnai, Endapan hitam terlihat di garis tengah pita A dan 2 dari setiap sarkomer, dan bagian yang tidak diwarnai digunakan untuk analisis mikro sinar-X. Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) digunakan untuk mengendapkan zat yang mengandung heme dan sebagainya. Kombinasi reaksi presipitasi histokimia dan jembatan diferensiasi mikro sinar-x dapat dipertimbangkan di laboratorium yang tidak memiliki kondisi penampang ultrathin beku. Semikuantitatif dapat dilakukan sesuai dengan tinggi puncak elemen yang akan dianalisis
